一,、大鼠肺靜脈平滑肌細(xì)胞簡(jiǎn)介：肺靜脈在用肺呼吸的脊椎動(dòng)物中,，把動(dòng)脈血由肺送回心臟的靜脈，是一個(gè)靜脈里流動(dòng)脈血的血管
一,、大鼠肺靜脈平滑肌細(xì)胞簡(jiǎn)介：
肺靜脈在用肺呼吸的脊椎動(dòng)物中,，把動(dòng)脈血由肺送回心臟的靜脈，是一個(gè)靜脈里流動(dòng)脈血的血管,。左右1對(duì)，共4條,，兩條連接右肺,，兩條連接左肺。肺大靜脈平滑肌細(xì)胞主要功能：（1）所表達(dá)的鈣通道表面表達(dá)的ICAM-1和VCAM-1,，參與血管壁炎癥反應(yīng),。（2）是多數(shù)重要?jiǎng)用}疾病的靶細(xì)胞,。（3）保持靜脈管腔的通暢。
本公司生產(chǎn)的大鼠肺靜脈平滑肌細(xì)胞采用酶解法制備而來(lái),，細(xì)胞總量約為5×105/T25方瓶,，α-SMA、Desmin呈陽(yáng)性,，細(xì)胞純度可達(dá)90%以上,，且不含有HIV-1、 HBV,、HCV,、支原體、細(xì)菌,、酵母和真菌等,。
二、 使用方法
1 ,、您收到細(xì)胞后,，請(qǐng)按照以下方法進(jìn)行操作：
取出 T25 方瓶， 75%酒精擦拭培養(yǎng)瓶,，拆下封口膜,，放入 37℃ , 5%CO2 細(xì)胞培養(yǎng)箱中靜置 2-3 小時(shí)， 以穩(wěn)定細(xì)胞狀態(tài),，然后打開(kāi)瓶子回收瓶子中培養(yǎng)液作為后續(xù)培養(yǎng)此細(xì)胞的培養(yǎng)液（備注： 先使用瓶子中培養(yǎng)液培養(yǎng)及盡快凍存保種細(xì)胞,， 保存種子后再嘗試自己完全培養(yǎng)液培養(yǎng)觀察是否適合此細(xì)胞生長(zhǎng)，以免使用自己培養(yǎng)液不適合細(xì)胞生長(zhǎng)造成細(xì)胞狀態(tài)不好或死亡） ,，最后按照后面細(xì)胞傳代步驟進(jìn)行細(xì)胞傳代培養(yǎng),。
2 、細(xì)胞傳代：
1）細(xì)胞生長(zhǎng)至覆蓋培養(yǎng)瓶的 90%面積時(shí),，棄 T25 方瓶中的培養(yǎng)液,， 用 PBS 清洗細(xì)胞 3 次；
2）添加 0.25%消化液約 2ml 至培養(yǎng)瓶中 37 度培養(yǎng)箱放置 3-5 分鐘,，倒置顯微鏡下觀察,，待細(xì)胞基本脫落后加入培養(yǎng)基終止消化，用滴管混勻并將懸液轉(zhuǎn)移至 15ml 離心管中,，1000rpm/min,，離心 5min；
3）棄上清,，沉淀細(xì)胞用 10ml 培養(yǎng)基重懸,，然后按 1:2 比例進(jìn)行分瓶傳代， 最后放入 37℃ ,5%CO2 細(xì)胞培養(yǎng)箱中培養(yǎng),；
4）待細(xì)胞貼壁后,， 觀察培養(yǎng)結(jié)果,，之后進(jìn)行換液培養(yǎng)或傳代。
3 ,、細(xì)胞凍存：
1）細(xì)胞生長(zhǎng)至覆蓋培養(yǎng)瓶的 90%面積時(shí),，棄 T25 方瓶中的培養(yǎng)液，用 PBS 清洗細(xì)胞 3 次,；
2）添加 0.25%消化液約 2ml 至培養(yǎng)瓶中 37 度培養(yǎng)箱放置 3-5 分鐘,，倒置顯微鏡下觀察，待細(xì)胞基本脫落后加入培養(yǎng)基終止消化,，用滴管混勻并將懸液轉(zhuǎn)移至 15ml 離心管中,，1000rpm/min，離心 5min,；
3）用適當(dāng)量的凍存液（培養(yǎng)液： FBS：DMSO=7:2:1）重懸細(xì)胞,，并放置于凍存管中；
4）先將細(xì)胞凍存管放置于-20℃ 1h,，然后將其移入-80℃過(guò)夜,， 24h 后轉(zhuǎn)入液氮中進(jìn)行長(zhǎng)期儲(chǔ)存（或者按照梯度程序降溫模式直接放置-80 度凍存后并轉(zhuǎn)移液氮中長(zhǎng)期儲(chǔ)存）。
4,、細(xì)胞復(fù)蘇：
1）從液氮中取出細(xì)胞凍存管（注意：佩戴防爆管面具） ,，快速將其置入 37℃水浴中解凍， 直至凍存管中無(wú)結(jié)晶,，然后用 75%的酒精擦拭凍存管外壁,；
2）將凍存管中的細(xì)胞轉(zhuǎn)移至含 5ml 培養(yǎng)液無(wú)菌離心管中，1000rpm 離心 5min ,，然后加入 5ml 完全培養(yǎng)液混勻細(xì)胞,， 將細(xì)胞懸液轉(zhuǎn)移至 T25 培養(yǎng)瓶中， 放置于 37℃ , 5%CO2 細(xì)胞培養(yǎng)箱中培養(yǎng),；
3）第二天,，換用新鮮培養(yǎng)基繼續(xù)培養(yǎng)。
