DH5α- 大腸桿菌感受態(tài)細(xì)胞
產(chǎn)品信息：
組成 BC116-01 BC116-02
DH5α- Competent cells 10×100µl 20×100µl
pUC19（0.1ng/µl） 5µl 5µl
儲(chǔ)存條件：-70℃保存,，避免反復(fù)凍融,。
產(chǎn)品介紹：
DH5α-菌株是實(shí)驗(yàn)室的感受態(tài)細(xì)胞,。缺失核酸內(nèi)切酶 (endA1),，提高了質(zhì)粒 DNA 的產(chǎn)量和質(zhì)量,；
重組酶缺陷型(recA1)減少插入片段的同源重組概率,，保證了插入 DNA 的穩(wěn)定性；由于 lacZΔM15 的存在以及
lac lq 基因的缺失，故不需要加 IPTG,，只需要添加 X-gal 就可進(jìn)行基于α互補(bǔ)原理上的藍(lán)白斑篩選實(shí)驗(yàn),。感受
態(tài)細(xì)胞經(jīng)特殊工藝制作，pUC19 質(zhì)粒檢測轉(zhuǎn)化效率大于 10 8 cfu/μg,。
基因型：
F -φ80dlacZ ΔM15,Δ(lacZYA -argF )U169 deoR, recA1endA1hsdR17 (rK -, mK + ) phoAsupE44 λ -thi -1gyrA96 relA1
產(chǎn)品特點(diǎn)：
缺失核酸內(nèi)切酶(endA1),，提高了質(zhì)粒 DNA 的產(chǎn)量和質(zhì)量；重組酶缺陷型(recA1)減少插入片段的同源重
組概率,，保證了插入 DNA 的穩(wěn)定性,；由于 lacZΔM15 的存在以及 lac I q 基因的缺失，故不需要加 IPTG,，只需
要添加 X-gal 就可進(jìn)行基于α互補(bǔ)原理上的藍(lán)白斑篩選實(shí)驗(yàn),。
操作步驟（以下操作均按無菌條件的標(biāo)準(zhǔn)進(jìn)行）：
提示
?
感受態(tài)細(xì)胞應(yīng)保存在-70℃，不可多次凍融和放置時(shí)間過長,，以避免降低感受態(tài)細(xì)胞的轉(zhuǎn)化效率,。
?
進(jìn)行轉(zhuǎn)化操作時(shí)，應(yīng)根據(jù)相應(yīng)溫度及無菌條件的要求進(jìn)行,。
?
為防止轉(zhuǎn)化實(shí)驗(yàn)不成功,，可以保留部分連接反應(yīng)液，以重新轉(zhuǎn)化,，將損失降到,。
1. 取感受態(tài)細(xì)胞置于冰浴中，如需分裝可將剛?cè)诨?xì)胞懸液分裝到無菌預(yù)冷的離心管中,，置于冰浴中,。
（一次轉(zhuǎn)化感受態(tài)細(xì)胞的建議用量為 50-100μl，可以根據(jù)實(shí)際情況分裝使用,。應(yīng)注意所用 DNA 體積
不要超過感受態(tài)細(xì)胞懸液體積的十分之一,。）以下實(shí)驗(yàn)以 100μl 感受態(tài)細(xì)胞為例。
2. 向感受態(tài)細(xì)胞懸液中加入目的 DNA,，輕輕旋轉(zhuǎn)離心管以混勻內(nèi)容物,，在冰浴中靜置 30 分鐘。
3. 將離心管置于 42℃水浴中放置 60 秒,，然后快速將管轉(zhuǎn)移到冰浴中,，使細(xì)胞冷卻 2 分鐘，該過程不要搖
動(dòng)離心管,。（此步驟也可將離心管置于室溫進(jìn)行,，時(shí)間不需十分準(zhǔn)確，夏季或室溫較高時(shí),，可放置 5-8
分鐘左右,；如果室溫較低,，可延長時(shí)間至 8-15 分鐘左右。條件允許建議使用 42℃熱激方法,。）
4. 向每個(gè)離心管中加入 500μl 無菌的 SOC 或 LB 培養(yǎng)基（不含抗生素）,，混勻后置于 37℃ 150rpm，搖床
振蕩培養(yǎng) 60 分鐘,，目的是使質(zhì)粒上相關(guān)的抗性標(biāo)記基因表達(dá),，使菌體復(fù)蘇。
5. 無菌條件下,，取適量菌液加到含相應(yīng)抗生素的 LB 固體培養(yǎng)基平板上，用無菌的細(xì)菌涂布器或玻璃珠將
細(xì)胞均勻涂開,。等平板中的液體吸收后,，倒置平板，37℃培養(yǎng) 12-16 小時(shí),。（涂布用量可根據(jù)具
體實(shí)驗(yàn)來調(diào)整,。轉(zhuǎn)化質(zhì)粒在 10ng 左右，90mm 平皿涂布 100µl,，55mm 平皿涂布 50µl,；連接產(chǎn)物的轉(zhuǎn)
化菌液建議離心后倒掉大部分上清，余 200µl,，取 100µl 用于涂布,。）
6. 保留剩余的菌液于 4℃冰箱中，視平板上菌落生長情況決定去留,。
（質(zhì)?？焖俎D(zhuǎn)化步驟：將步驟 2 的時(shí)間縮短到 5 分鐘，對(duì)于氨芐抗性的質(zhì)粒,，步驟 3 完成后,，可
直接涂布或劃線于含氨芐抗性的 LB 平板上。其它抗性的質(zhì)粒仍需 60 分鐘的復(fù)蘇培養(yǎng),。）
相關(guān)試劑及培養(yǎng)基的制備方法：
1. LB 液體培養(yǎng)基：稱取 10g Tryptone,，5g Yeast Extract 和 10g NaCl 置于 1L 燒杯中。加入約 800ml 的去
離子水,，溶解后用 2mol/L 的 NaOH 溶液調(diào)節(jié) pH 值至 7.0,。加去離子水定容至 1L。分裝后,，121℃
高壓滅菌 20 分鐘,。
2. SOB 和 SOC 培養(yǎng)基：稱取 20g Tryptone，5g Yeast Extract,，0.5g NaCl 置于 1L 燒杯中加入約 800ml 的去
離子水,，溶解后再補(bǔ)加 10ml 250mM KCl 溶液,，滴加 5M NaOH（約 0.2ml）調(diào) pH 至 7.0。加入去
離子水將培養(yǎng)基定容至 1L,。121℃滅菌 20 分鐘,。使用時(shí)加入 5ml 滅菌的 2M MgCl2 溶液（此種培養(yǎng)基
稱為 SOB）。再補(bǔ)加經(jīng) 0.22µm 過濾除菌的 1M 葡萄糖溶液 2ml（此種培養(yǎng)基為 SOC）,。
3. 轉(zhuǎn)化復(fù)蘇細(xì)菌用的液體 LB 培養(yǎng)基或 SOC 培養(yǎng)基：可以一次高壓 50ml 液體培養(yǎng)基,，無菌狀態(tài)按 1ml
每管分裝于高壓滅菌的 1.5ml 離心管中，裝于自封袋中,，凍存于-20℃中,，每次用一支?？梢詷O大地避
免培養(yǎng)基污染和減少勞動(dòng)量,。
4. LB 固體選擇培養(yǎng)基：100ml LB 液體培養(yǎng)基中加入 1.5g 瓊脂粉，搖勻后,，121℃高壓滅菌 20 分鐘,。冷
卻至 50℃左右時(shí)加入相應(yīng)濃度的抗生素（如 AMP 濃度通常為 100µg/ml），混勻后倒在細(xì)菌用的無菌培
養(yǎng)皿中,，等瓊脂凝固后即可使用,。
5. IPTG：稱量 1.9g IPTG（MW=238.31）充分溶解于 40 ml 滅菌水，濃度為 200mmol/L,。用無菌 0.22μm
過濾膜過濾除菌,。小份分裝后，-20℃保存,。
6. X-gal：用 DMF（二甲基甲酰胺）配制成 20mg/ml,，小份分裝（1ml/份）后，-20℃避光保存,。


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抗體：兔多抗、鼠單抗種類豐富,，一抗 1 萬余種,，二抗 100 多種；
重組蛋白：多項(xiàng)發(fā)明,，原核表達(dá)系統(tǒng)穩(wěn)定表達(dá)蛋白 1000 余種,。


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