豬骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞（原代）簡(jiǎn)介：  

骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞是干細(xì)胞家族的重要成員，來(lái)源于發(fā)育早期的中胚層和外胚層,。骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞最初在骨髓中發(fā)現(xiàn),，因其具有多向分化潛能、造血支持和促進(jìn)干細(xì)胞植入,、免疫調(diào)控和自我復(fù)制等特點(diǎn)而日益受到人們的關(guān)注,。如間充質(zhì)干細(xì)胞在體內(nèi)或體外特定的誘導(dǎo)條件下，可分化為脂肪,、骨,、軟骨、肌肉、肌腱,、韌帶,、神經(jīng)、肝,、心肌,、內(nèi)皮等多種組織細(xì)胞，連續(xù)傳代培養(yǎng)和冷凍保存后仍具有多向分化潛能,，可作為理想的種子細(xì)胞用于衰老和病變引起的組織器官損傷修復(fù),。  

本公司生產(chǎn)的豬骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞采用密度梯度離心法制備而來(lái)，細(xì)胞總量約為5×105/T25方瓶,，CD29,、CD44呈陽(yáng)性；CD45,、CD90呈陰性,，細(xì)胞純度可達(dá)90%以上，且不含有HIV-1,、HBV,、HCV、支原體,、細(xì)菌,、酵母和真菌等。  

豬骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞（原代）使用方法：    

1,、您收到細(xì)胞后,，請(qǐng)按照以下方法進(jìn)行操作：  

取出T25方瓶，75%酒精擦拭培養(yǎng)瓶,，拆下封口膜,，放入37℃,5%CO2細(xì)胞培養(yǎng)箱中靜置2-3小時(shí),，以穩(wěn)定細(xì)胞狀態(tài),，然后打開(kāi)瓶子回收瓶子中培養(yǎng)液作為后續(xù)培養(yǎng)此細(xì)胞的培養(yǎng)液（備注：先使用瓶子中培養(yǎng)液培養(yǎng)及盡快凍存保種細(xì)胞，保存種子后再嘗試自己培養(yǎng)液培養(yǎng)觀察是否適合此細(xì)胞生長(zhǎng),，以免使用自己培養(yǎng)液不適合細(xì)胞生長(zhǎng)造成細(xì)胞狀態(tài)不好或死亡）,，最后按照后面細(xì)胞傳代步驟進(jìn)行細(xì)胞傳代培養(yǎng)。  

2,、細(xì)胞傳代：  

1細(xì)胞生長(zhǎng)至覆蓋培養(yǎng)瓶的90%面積時(shí),，棄T25方瓶中的培養(yǎng)液，用PBS清洗細(xì)胞3次,；  

2添加0.25%消化液約2ml至培養(yǎng)瓶中37度培養(yǎng)箱放置3-5分鐘,，倒置顯微鏡下觀察，待細(xì)胞基本脫落后加入培養(yǎng)基終止消化,，用滴管混勻并將懸液轉(zhuǎn)移至15ml離心管中,，1000rpm/min,，離心5min；  

3棄上清,，沉淀細(xì)胞用10ml培養(yǎng)基重懸,，然后按1:2比例進(jìn)行分瓶傳代，最后放入37℃,5%CO2細(xì)胞培養(yǎng)箱中培養(yǎng),；  

4待細(xì)胞貼壁后,，觀察培養(yǎng)結(jié)果，之后進(jìn)行換液培養(yǎng)或傳代,。  

3,、細(xì)胞凍存：  

1細(xì)胞生長(zhǎng)至覆蓋培養(yǎng)瓶的90%面積時(shí)，棄T25方瓶中的培養(yǎng)液,，用PBS清洗細(xì)胞3次,；  

2添加0.25%消化液約2ml至培養(yǎng)瓶中37度培養(yǎng)箱放置3-5分鐘，倒置顯微鏡下觀察,，待細(xì)胞基本脫落后加入培養(yǎng)基終止消化,，用滴管混勻并將懸液轉(zhuǎn)移至15ml離心管中，1000rpm/min,，離心5min,；  

3用適當(dāng)量的凍存液（培養(yǎng)液：FBS：DMSO=7:2:1）重懸細(xì)胞，并放置于凍存管中,；  

4先將細(xì)胞凍存管放置于-20℃1h,，然后將其移入-80℃過(guò)夜，24h后轉(zhuǎn)入液氮中進(jìn)行長(zhǎng)期儲(chǔ)存（或者按照梯度程序降溫模式直接放置-80度凍存后并轉(zhuǎn)移液氮中長(zhǎng)期儲(chǔ)存）,。  

4,、細(xì)胞復(fù)蘇：  

1從液氮中取出細(xì)胞凍存管（注意：佩戴防爆管面具），快速將其置入37℃水浴中解凍,，直至凍存管中無(wú)結(jié)晶,，然后用75%的酒精擦拭凍存管外壁；  

2將凍存管中的細(xì)胞轉(zhuǎn)移至含5ml培養(yǎng)液無(wú)菌離心管中,，1000rpm離心5min,，然后加入5ml培養(yǎng)液混勻細(xì)胞，將細(xì)胞懸液轉(zhuǎn)移至T25培養(yǎng)瓶中,，放置于37℃,5%CO2細(xì)胞培養(yǎng)箱中培養(yǎng),；  

3第二天，換用新鮮培養(yǎng)基繼續(xù)培養(yǎng),。