一,、小鼠腎靜脈平滑肌細(xì)胞簡介 腎靜脈,，起自腎門，在同名動脈前方橫向內(nèi)側(cè)注入下腔靜脈,，越過腹主動脈前面,，并接受左腎上腺靜脈和左睪丸（卵巢）靜脈
一、小鼠腎靜脈平滑肌細(xì)胞簡介
腎靜脈,，起自腎門,，在同名動脈前方橫向內(nèi)側(cè)注入下腔靜脈，越過腹主動脈前面,，并接受左腎上腺靜脈和左睪丸（卵巢）靜脈,。平滑肌細(xì)胞的生長能力為原發(fā)血管疾病的重要異常因素；平滑肌細(xì)胞能夠表達(dá)鈣通道及ICAM-1和VCAM-1,，其參與血管壁的炎癥反應(yīng),，并與血管疾病的進展和穩(wěn)定相關(guān)。
本公司生產(chǎn)的小鼠腎靜脈平滑肌細(xì)胞采用酶解法制備而來,，細(xì)胞總量約為5×105/T25方瓶,，α-SMA、Desmin呈陽性,，細(xì)胞純度可達(dá)90%以上,，且不含有HIV-1、 HBV,、HCV,、支原體,、細(xì)菌,、酵母和真菌等。
二,、 使用方法
1 ,、您收到細(xì)胞后,，請按照以下方法進行操作：
取出 T25 方瓶， 75%酒精擦拭培養(yǎng)瓶,，拆下封口膜,，放入 37℃ , 5%CO2 細(xì)胞培養(yǎng)箱中靜置 2-3 小時， 以穩(wěn)定細(xì)胞狀態(tài),，然后打開瓶子回收瓶子中培養(yǎng)液作為后續(xù)培養(yǎng)此細(xì)胞的培養(yǎng)液（備注： 先使用瓶子中培養(yǎng)液培養(yǎng)及盡快凍存保種細(xì)胞,， 保存種子后再嘗試自己完全培養(yǎng)液培養(yǎng)觀察是否適合此細(xì)胞生長，以免使用自己培養(yǎng)液不適合細(xì)胞生長造成細(xì)胞狀態(tài)不好或死亡） ,，最后按照后面細(xì)胞傳代步驟進行細(xì)胞傳代培養(yǎng),。
2 、細(xì)胞傳代：
1）細(xì)胞生長至覆蓋培養(yǎng)瓶的 90%面積時,，棄 T25 方瓶中的培養(yǎng)液,， 用 PBS 清洗細(xì)胞 3 次；
2）添加 0.25%消化液約 2ml 至培養(yǎng)瓶中 37 度培養(yǎng)箱放置 3-5 分鐘,，倒置顯微鏡下觀察,，待細(xì)胞基本脫落后加入培養(yǎng)基終止消化，用滴管混勻并將懸液轉(zhuǎn)移至 15ml 離心管中,，1000rpm/min,，離心 5min；
3）棄上清,，沉淀細(xì)胞用 10ml 培養(yǎng)基重懸,，然后按 1:2 比例進行分瓶傳代， 最后放入 37℃ ,5%CO2 細(xì)胞培養(yǎng)箱中培養(yǎng),；
4）待細(xì)胞貼壁后,， 觀察培養(yǎng)結(jié)果，之后進行換液培養(yǎng)或傳代,。
3 ,、細(xì)胞凍存：
1）細(xì)胞生長至覆蓋培養(yǎng)瓶的 90%面積時，棄 T25 方瓶中的培養(yǎng)液,，用 PBS 清洗細(xì)胞 3 次,；
2）添加 0.25%消化液約 2ml 至培養(yǎng)瓶中 37 度培養(yǎng)箱放置 3-5 分鐘，倒置顯微鏡下觀察,，待細(xì)胞基本脫落后加入培養(yǎng)基終止消化,，用滴管混勻并將懸液轉(zhuǎn)移至 15ml 離心管中，1000rpm/min,，離心 5min,；
3）用適當(dāng)量的凍存液（培養(yǎng)液： FBS：DMSO=7:2:1）重懸細(xì)胞，并放置于凍存管中,；
4）先將細(xì)胞凍存管放置于-20℃ 1h,，然后將其移入-80℃過夜,， 24h 后轉(zhuǎn)入液氮中進行長期儲存（或者按照梯度程序降溫模式直接放置-80 度凍存后并轉(zhuǎn)移液氮中長期儲存）。
4,、細(xì)胞復(fù)蘇：
1）從液氮中取出細(xì)胞凍存管（注意：佩戴防爆管面具） ,，快速將其置入 37℃水浴中解凍， 直至凍存管中無結(jié)晶,，然后用 75%的酒精擦拭凍存管外壁,； 2）將凍存管中的細(xì)胞轉(zhuǎn)移至含 5ml 培養(yǎng)液無菌離心管中，1000rpm 離心 5min ,，然后加入 5ml 完全培養(yǎng)液混勻細(xì)胞,， 將細(xì)胞懸液轉(zhuǎn)移至 T25 培養(yǎng)瓶中， 放置于 37℃ , 5%CO2 細(xì)胞培養(yǎng)箱中培養(yǎng),；
3）第二天,，換用新鮮培養(yǎng)基繼續(xù)培養(yǎng)。
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