一,、永生化人腎上皮細胞簡介：雖然原代人腎上皮細胞最更能真實地反映腎上皮細胞在人體內(nèi)的生理狀態(tài),，但是一方面人腎組織非常珍貴，原代分離培養(yǎng)人腎上皮細胞周期長及對技術(shù)人員經(jīng)驗要求較高,，另一方面此原代細胞生長較慢及在體外不能傳代,，這些不利因素制約了原代人腎上皮細胞在實驗室的廣泛應(yīng)用
一、永生化人腎上皮細胞簡介：
雖然原代人腎上皮細胞最更能真實地反映腎上皮細胞在人體內(nèi)的生理狀態(tài),，但是一方面人腎組織非常珍貴,，原代分離培養(yǎng)人腎上皮細胞周期長及對技術(shù)人員經(jīng)驗要求較高，另一方面此原代細胞生長較慢及在體外不能傳代,，這些不利因素制約了原代人腎上皮細胞在實驗室的廣泛應(yīng)用,。我公司的研究團隊擁有多年原代細胞分離培養(yǎng)及細胞永生化服務(wù)研究經(jīng)驗，成功建立了永生化人腎上皮細胞,。
腎小管上皮細胞對腎功能的發(fā)揮起著重要作用,。它們幾乎能重吸小球濾過液中所有的葡萄糖和氨基酸，并使其它非營養(yǎng)物質(zhì)排泄到尿液中,。腎小管上皮細胞能產(chǎn)生包括細胞因子和趨化因子在內(nèi)的炎性介質(zhì),，并通過產(chǎn)生IL-8從而影響和指導(dǎo)白細胞的分化來積極參與急性炎癥過程。在腎臟移植后或新月體腎炎的炎癥過程中,，腎小管上皮細胞表達IL-2 α受體和II類MHC抗原,，這表明它們參與腎臟免疫系統(tǒng)損傷的發(fā)病機理。
腎小球是,，腎小球毛細血管壁構(gòu)成過濾膜,。腎小球外層為上皮細胞層上皮細胞又稱足細胞，其不規(guī)則突起稱足突,，其間有許多狹小間隙,，血液經(jīng)濾膜過濾后，濾液入腎小球囊,。在正常情況下,，血液中絕大部分蛋白質(zhì)不能濾過而保留于血液中，僅小分子物質(zhì)如尿素,、葡萄糖,、電解質(zhì)及某些小分子蛋白能濾過。
本公司生產(chǎn)的永生化人腎上皮細胞采用酶解法和基因轉(zhuǎn)染制備而來,，細胞總量約為1×106/T25方瓶,，細胞純度可達90%以上，且不含有HIV-1、 HBV,、HCV,、支原體、細菌,、酵母和真菌等,。
二、 使用方法
1 ,、您收到細胞后,，請按照以下方法進行操作：
取出 T25 方瓶， 75%酒精擦拭培養(yǎng)瓶,，拆下封口膜，放入 37℃ , 5%CO2 細胞培養(yǎng)箱中靜置 2-3 小時,， 以穩(wěn)定細胞狀態(tài),，然后打開瓶子回收瓶子中培養(yǎng)液作為后續(xù)培養(yǎng)此細胞的培養(yǎng)液（備注： 先使用瓶子中培養(yǎng)液培養(yǎng)及盡快凍存保種細胞， 保存種子后再嘗試自己完全培養(yǎng)液培養(yǎng)觀察是否適合此細胞生長,，以免使用自己培養(yǎng)液不適合細胞生長造成細胞狀態(tài)不好或死亡） ,，最后按照后面細胞傳代步驟進行細胞傳代培養(yǎng)。
2 ,、細胞傳代：
1）細胞生長至覆蓋培養(yǎng)瓶的 90%面積時,，棄 T25 方瓶中的培養(yǎng)液， 用 PBS 清洗細胞 3 次,；
2）添加 0.25%消化液約 2ml 至培養(yǎng)瓶中 37 度培養(yǎng)箱放置 3-5 分鐘,，倒置顯微鏡下觀察，待細胞基本脫落后加入培養(yǎng)基終止消化,，用滴管混勻并將懸液轉(zhuǎn)移至 15ml 離心管中,，1000rpm/min，離心 5min,；
3）棄上清,，沉淀細胞用 10ml 培養(yǎng)基重懸，然后按 1:2 比例進行分瓶傳代,， 最后放入 37℃ ,5%CO2 細胞培養(yǎng)箱中培養(yǎng),；
4）待細胞貼壁后， 觀察培養(yǎng)結(jié)果,，之后進行換液培養(yǎng)或傳代,。
3 、細胞凍存：
1）細胞生長至覆蓋培養(yǎng)瓶的 90%面積時,，棄 T25 方瓶中的培養(yǎng)液,，用 PBS 清洗細胞 3 次；
2）添加 0.25%消化液約 2ml 至培養(yǎng)瓶中 37 度培養(yǎng)箱放置 3-5 分鐘，倒置顯微鏡下觀察,，待細胞基本脫落后加入培養(yǎng)基終止消化,，用滴管混勻并將懸液轉(zhuǎn)移至 15ml 離心管中，1000rpm/min,，離心 5min,；
3）用適當(dāng)量的凍存液（培養(yǎng)液： FBS：DMSO=7:2:1）重懸細胞，并放置于凍存管中,；
4）先將細胞凍存管放置于-20℃ 1h,，然后將其移入-80℃過夜， 24h 后轉(zhuǎn)入液氮中進行長期儲存（或者按照梯度程序降溫模式直接放置-80 度凍存后并轉(zhuǎn)移液氮中長期儲存）,。
4,、細胞復(fù)蘇：
1）從液氮中取出細胞凍存管（注意：佩戴防爆管面具） ，快速將其置入 37℃水浴中解凍,， 直至凍存管中無結(jié)晶,，然后用 75%的酒精擦拭凍存管外壁； 2）將凍存管中的細胞轉(zhuǎn)移至含 5ml 培養(yǎng)液無菌離心管中,，1000rpm 離心 5min ,，然后加入 5ml 完全培養(yǎng)液混勻細胞， 將細胞懸液轉(zhuǎn)移至 T25 培養(yǎng)瓶中,， 放置于 37℃ , 5%CO2 細胞培養(yǎng)箱中培養(yǎng),；
3）第二天，換用新鮮培養(yǎng)基繼續(xù)培養(yǎng),。
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