一,、兔主動脈內(nèi)皮細胞簡介：兔主動脈內(nèi)皮細胞（RatArteryEndothelialCells）來源于成年兔主動脈組織,，其是組成主動脈腔面單層扁平上皮樣細胞，大多呈梭形,，它所產(chǎn)生和分泌的生物活性物質(zhì)對維持血管張力，調(diào)節(jié)血壓，抗血栓形成等有重要作用,，在高血壓，心,、腦血管疾病的發(fā)病機制中有重要病理生理學意義
一,、兔主動脈內(nèi)皮細胞簡介：
兔主動脈內(nèi)皮細胞（Rat Artery Endothelial Cells）來源于成年兔主動脈組織，其是組成主動脈腔面單層扁平上皮樣細胞,，大多呈梭形,，它所產(chǎn)生和分泌的生物活性物質(zhì)對維持血管張力，調(diào)節(jié)血壓,，抗血栓形成等有重要作用,，在高血壓，心,、腦血管疾病的發(fā)病機制中有重要病理生理學意義,。
本公司生產(chǎn)的兔主動脈內(nèi)皮細胞采用酶解法制備而來，細胞總量約為5×105/T25方瓶,，vWF,、Factor VIII呈陽性，細胞純度可達90%以上,，且不含有HIV-1,、 HBV、HCV,、支原體,、細菌、酵母和真菌等,。
二,、 使用方法
1 、您收到細胞后,，請按照以下方法進行操作：
取出 T25 方瓶,， 75%酒精擦拭培養(yǎng)瓶，拆下封口膜,，放入 37℃ , 5%CO2 細胞培養(yǎng)箱中靜置 2-3 小時,， 以穩(wěn)定細胞狀態(tài)，然后打開瓶子回收瓶子中培養(yǎng)液作為后續(xù)培養(yǎng)此細胞的培養(yǎng)液（備注： 先使用瓶子中培養(yǎng)液培養(yǎng)及盡快凍存保種細胞， 保存種子后再嘗試自己完全培養(yǎng)液培養(yǎng)觀察是否適合此細胞生長,，以免使用自己培養(yǎng)液不適合細胞生長造成細胞狀態(tài)不好或死亡） ,，最后按照后面細胞傳代步驟進行細胞傳代培養(yǎng)。
2 ,、細胞傳代：
1）細胞生長至覆蓋培養(yǎng)瓶的 90%面積時,，棄 T25 方瓶中的培養(yǎng)液， 用 PBS 清洗細胞 3 次,；
2）添加 0.25%消化液約 2ml 至培養(yǎng)瓶中 37 度培養(yǎng)箱放置 3-5 分鐘,，倒置顯微鏡下觀察，待細胞基本脫落后加入培養(yǎng)基終止消化,，用滴管混勻并將懸液轉(zhuǎn)移至 15ml 離心管中,，1000rpm/min，離心 5min,；
3）棄上清,，沉淀細胞用 10ml 培養(yǎng)基重懸，然后按 1:2 比例進行分瓶傳代,， 最后放入 37℃ ,5%CO2 細胞培養(yǎng)箱中培養(yǎng)；
4）待細胞貼壁后,， 觀察培養(yǎng)結(jié)果,，之后進行換液培養(yǎng)或傳代。
3 ,、細胞凍存：
1）細胞生長至覆蓋培養(yǎng)瓶的 90%面積時,，棄 T25 方瓶中的培養(yǎng)液，用 PBS 清洗細胞 3 次,；
2）添加 0.25%消化液約 2ml 至培養(yǎng)瓶中 37 度培養(yǎng)箱放置 3-5 分鐘,，倒置顯微鏡下觀察，待細胞基本脫落后加入培養(yǎng)基終止消化,，用滴管混勻并將懸液轉(zhuǎn)移至 15ml 離心管中,，1000rpm/min，離心 5min,；
3）用適當量的凍存液（培養(yǎng)液： FBS：DMSO=7:2:1）重懸細胞,，并放置于凍存管中；
4）先將細胞凍存管放置于-20℃ 1h,，然后將其移入-80℃過夜,， 24h 后轉(zhuǎn)入液氮中進行長期儲存（或者按照梯度程序降溫模式直接放置-80 度凍存后并轉(zhuǎn)移液氮中長期儲存）。
4,、細胞復蘇：
1）從液氮中取出細胞凍存管（注意：佩戴防爆管面具） ,，快速將其置入 37℃水浴中解凍， 直至凍存管中無結(jié)晶,，然后用 75%的酒精擦拭凍存管外壁,； 2）將凍存管中的細胞轉(zhuǎn)移至含 5ml 培養(yǎng)液無菌離心管中,，1000rpm 離心 5min ，然后加入 5ml 完全培養(yǎng)液混勻細胞,， 將細胞懸液轉(zhuǎn)移至 T25 培養(yǎng)瓶中,， 放置于 37℃ , 5%CO2 細胞培養(yǎng)箱中培養(yǎng)；
3）第二天,，換用新鮮培養(yǎng)基繼續(xù)培養(yǎng),。
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