本試劑盒采用雙抗體夾心兩步法酶聯(lián)免疫吸附試驗(ELISA),。在預(yù)包被抗人白蛋白(ALB)抗體(固相抗體)的微孔酶標板中,,加入人白蛋白(ALB)校準品和待測樣本,,再加入shengwusu標記抗體,經(jīng)過溫育與充分洗滌后,,再加入HRP偶聯(lián)的親和素,,經(jīng)過溫育與充分洗滌,去除未結(jié)合的組分,,在微孔板固相表面形成固相抗體-抗原-shengwusu標記抗體-親和素酶的夾心復(fù)合物,。加底物A和B,,產(chǎn)生藍色產(chǎn)物,,在終止液作用下,最終轉(zhuǎn)化為黃色,,在酶標儀450nm波長上測定吸光度(OD值),,吸光度(OD值)與待測樣品中人白蛋白(ALB)的濃度正相關(guān)。擬合校準品曲線,,可以計算出樣本中人白蛋白(ALB)的濃度,。
所有試劑和組分都先恢復(fù)到室溫,,標準品、質(zhì)控品和樣品,,建議做復(fù)孔,。
1、按前面說明書描述的方法,,配制好試劑盒各種組分的工作液,。
2、從鋁箔袋中取出所需板條,,剩余的板條用自封袋密封放回冰箱,。
3,、設(shè)置標準品孔、yangben稀釋液孔,、空白孔和樣本孔,,標準品孔各加不同濃度的標準品50μL,yangben稀釋液孔加yangben稀釋液50μL,,空白孔不加,,樣本孔加待測樣本50μL。除空白孔外,,每孔加入shengwusu抗體100uL,,用封板膜蓋住反應(yīng)板,37℃水浴鍋或恒溫箱避光溫育60min,。
4,、揭開封板膜,棄去液體,,吸水紙上拍干,,每孔加滿洗滌液,靜置1min,,甩去洗滌液,,吸水紙上拍干,如此重復(fù)5次,。若使用自動洗板機,,請按洗板機操作程序進行洗板,添加浸泡30s的程序,,可以提高檢測的精度,。洗板結(jié)束,加底物前,,要在干凈不掉屑的紙上,,充分拍干反應(yīng)板。
5,、除空白孔外,,每孔加入HRP標記親和素100uL,用封板膜蓋住反應(yīng)板,,37℃水浴鍋或恒溫箱避光溫育20min,。
6、重復(fù)步驟4,。
7,、將底物A和B按1:1體積充分混合,所有孔中加入底物混合液100μL。用封板膜蓋住反應(yīng)板,,37℃水浴鍋或恒溫箱避光溫育15min,。
8、所有孔加入終止液50μL,,在450nm波長酶標儀上讀取各孔吸光度(OD值),。
備注:圖片僅供參考。僅供科研,,不可用于臨床,。