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實(shí)驗(yàn)室有幾種組織細(xì)胞破碎方法
實(shí)驗(yàn)室對(duì)組織細(xì)胞的破碎方法很多,，有機(jī)械方法,、物理方法,、化學(xué)方法和生物化學(xué)方法等,。
在破碎前,，材料常需要預(yù)處理，如動(dòng)物材料要除去與實(shí)驗(yàn)無關(guān)甚至有妨礙的結(jié)締組織,，脂肪組織和血污等,，植物種子需要除殼，微生物材料需將菌體和發(fā)酵液成分分開等,。不同實(shí)驗(yàn)規(guī)模,、不同實(shí)驗(yàn)材料和實(shí)驗(yàn)要求，使用的破碎方法和條件也不同,。一些堅(jiān)韌組織,，如肌肉、植物的根莖等,，常需要強(qiáng)烈的攪拌或研磨作用,，才能把其組織細(xì)胞破壞。而比較柔軟的組織如肝,、腦等,，用普通的玻璃勻漿器即可達(dá)到*破壞細(xì)胞的目的。對(duì)同一實(shí)驗(yàn)材料，由于實(shí)驗(yàn)?zāi)康模ㄒ螅┑牟煌?，采用的破碎方式也存在一定差異,，如提取中的核酸和提取其中的核苷酸，前者必須保持十分溫和的條件,，以保持分子的完整性,；后者可采用強(qiáng)烈手段。
1． 機(jī)械法
主要通過機(jī)械切力的作用使組織細(xì)胞破碎的方法,，常用的器械有組織搗碎機(jī),、勻漿器、研缽和研磨,、壓榨器等,。
1）組織搗碎機(jī) 一般用于動(dòng)物組織、植物肉質(zhì)種子,、柔嫩的葉芽等,，轉(zhuǎn)速可高達(dá)10000rpm/M以上。由于旋轉(zhuǎn)刀片的機(jī)械切力很大,制備一些較大分子如核酸則很少使用,。
2）勻漿器 勻漿器的研缽磨球和玻璃管內(nèi)壁之間間隙保持在十分之幾毫米距離,，破碎細(xì)胞的程度比組織搗碎機(jī)高。制作勻漿器的材料,，除玻璃外,，還可以用硬質(zhì)塑料、不銹鋼,、人造熒光樹脂等,。
3）研缽 多用于細(xì)菌或其他堅(jiān)硬植物材料，研磨時(shí)常加入少量石英砂,，玻璃粉或其他研磨劑,，以提高研磨效果。
4）細(xì)菌磨 是一種改良了的研磨器,，比研缽具有更大的研磨面積,，而且低部有出口。操作時(shí)先把細(xì)菌和研磨粉調(diào)成糊狀,，每次加入一小勺,，研磨20-30秒即可將細(xì)菌細(xì)胞*磨碎。
2．化學(xué)及生物化學(xué)法
有自溶法,，酶解法和表面活性劑法等,。
1）自溶法 在一定PH和適當(dāng)?shù)臏囟认拢媒M織細(xì)胞內(nèi)自身的酶系統(tǒng)將細(xì)胞破碎的方法,。此過程需較長時(shí)間,，常用少量防腐劑如甲苯,、仿等防止細(xì)胞的污染。
2）酶溶法 利用各種水解酶,，如溶菌酶,、纖維素酶、蝸牛酶,、半纖維素酶,、脂酶等，將細(xì)胞壁分解,，使細(xì)胞內(nèi)含物釋放出來。有些細(xì)菌對(duì)溶菌酶不敏感,，加入少量巰基試劑或8摩爾尿素處理后,，使之轉(zhuǎn)為對(duì)溶菌酶敏感而溶解。
3）表面活性劑處理 如十二烷基硫酸鈉,、氯化十二烷基吡啶等,。
3．物理法
主要通過各種物理因素使組織細(xì)胞破碎的方法。在生化制備中常用的方法有：
1）反復(fù)凍溶法 先將樣品深冷至-15---20度使之凍固,，再緩慢的融化,，反復(fù)多次，多用于動(dòng)物性材料,。
2）急熱驟冷法 將材料投入沸水中,，維持85-90分鐘，至水浴中急速冷卻,，此法可用于細(xì)菌及病毒材料,。
3）超聲波處理 頻率一般選在10KC至200KC，功率200-500瓦范圍,，處理時(shí)間有數(shù)分鐘至數(shù)十分鐘不等,，處理過程中注意冷卻。此法多用于微生物材料,。