使用細胞計數(shù)器的三個tip
市場上近幾年涌現(xiàn)出不少自動細胞計數(shù)器。這種儀器利用光學顯微鏡技術(shù),，但帶來了更高的準確性,、重復性，并將這一單調(diào)的工作自動化,。樣品體積小也是這種細胞計數(shù)器的額外優(yōu)勢,。許多儀器使用一次性的玻片，只需要10-20 uL樣品,。將玻片插入自動細胞計數(shù)器中,，照相機捕獲圖像。隨后內(nèi)置的軟件分析圖像,，顯示細胞數(shù)量等信息,。
在此，專家介紹了使用自動細胞計數(shù)器的三個tip,。
準確對焦
與其他光學顯微鏡一樣,，儀器的準確對焦對于計數(shù)很關(guān)鍵。在手動計數(shù)時,，訓練有素的大腦可輕松鑒定細胞,。然而,，自動細胞計數(shù)器內(nèi)的照相機檢測活細胞的亮中心和暗邊緣,，將其處理成黑白像素信息。如果細胞未準確對焦,，那么亮中心將有明顯的灰度,，會被誤認為是死細胞,。
大部分研究人員將會發(fā)現(xiàn)對焦并不難，只要顯示在屏幕上的圖像質(zhì)量與傳統(tǒng)的顯微鏡相似,。確保你有一張清晰的圖像,，這很重要。另一點是要了解細胞計數(shù)器中照相機的分辨率,。如果自動細胞計數(shù)器以低的幀速顯示,，如每秒小于15幀，那么顯示的圖像將不能實時響應(yīng)聚焦旋鈕的微調(diào),。
控制玻片之間的差異
大部分基于圖像的自動細胞計數(shù)器都使用一次性的玻片,，其上有明確的測量區(qū)域。這一測量區(qū)域被物鏡的放大率和照相機的圖像傳感器大小所設(shè)定,。這些細胞計數(shù)器通常測定0.4-0.5 uL樣品,，相當于血球計數(shù)器的4-5個大方格。
與血球計數(shù)器不同,，計數(shù)玻片通常只使用一次,。因此，玻片之間的差異會顯著影響細胞計數(shù)的結(jié)果,。對于某一組實驗,，好使用同一批號的玻片，盡量避免這些差異,。在更換批號時,，也建議用標準的微珠來檢驗玻片。大部分細胞計數(shù)器制造商都提供已知濃度的標準微珠,。使用相同的微珠樣品來檢驗不同的玻片,，將有助于發(fā)現(xiàn)差異。
評估軟件的分簇性能
自動細胞計數(shù)器的核心是開展分析的軟件,，它相當于手動計數(shù)時的人腦,。大部分的自動細胞計數(shù)器包含集成軟件，能準確地計算單細胞群體的數(shù)量,。然而,，在談到成簇細胞的計數(shù)時，細胞計數(shù)器就會存在明顯差異,。由于從培養(yǎng)細胞中獲得的樣品并不總是單細胞群體,，因此，有時會有多個細胞團塊,，而自動細胞計數(shù)器的分簇（declustering）性能也仔細評估,。評估分簇性能時可開展圖1的檢測。
圖1. 將HL-60細胞加熱到70°C，處理20分鐘,，殺死細胞,，獲得死細胞樣品。隨后利用兩款不同的自動細胞計數(shù)器進行樣品的檢測,。在細胞計數(shù)之后,，根據(jù)軟件捕獲的圖像進行比較。紅色圓圈：死細胞,；藍色圓圈：活細胞,；黑色圓圈：排除的對象。
自動細胞計數(shù)器正在取代單調(diào)乏味的手動計數(shù)方法,。隨著對一些基本原理的了解,，自動細胞計數(shù)器將幫助你獲得佳的結(jié)果。
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