Raji(人Burkitt's淋巴瘤細(xì)胞)株源自—位11歲黑人男孩的左上頜骨的Burkitt's淋巴瘤,;EBNA陽(yáng)性,。
一、細(xì)胞基本屬性
細(xì)胞名稱 :Raji(人Burkitt's淋巴瘤細(xì)胞)
細(xì)胞別稱: Raji; RAJI; P1-Raji; GM04671
細(xì)胞貨號(hào) :SNL-048
細(xì)胞種屬: 人
生長(zhǎng)情況 :懸浮
培養(yǎng)條件 :1640+10%FBS+1%雙抗
培養(yǎng)環(huán)境 :air, 95%; carbon dioxide (CO2), 5%
二,、細(xì)胞培養(yǎng)操作
換液周期 :2-3天
培養(yǎng)基體積 :T25瓶10-12ml,;10cm皿12-15ml
傳代比例 :1:2-1:4(具體情況視細(xì)胞生長(zhǎng)速度及密度決定)
傳代方法 :
1.混勻細(xì)胞,收集細(xì)胞培養(yǎng)基,,900rpm離心3-5min,,棄上清;
2.加新的*培養(yǎng)基輕輕重懸細(xì)胞,,均勻分到新的培養(yǎng)瓶里,;
3.補(bǔ)足*培養(yǎng)基,將培養(yǎng)瓶放回培養(yǎng)箱靜置培養(yǎng),;
注意事項(xiàng) :部分懸浮細(xì)胞會(huì)附著瓶底,,輕輕晃動(dòng)培養(yǎng)基或者吹打細(xì)胞面就會(huì)脫落,,不需要胰酶消化。建議使用培養(yǎng)皿培養(yǎng),,更適合吹打細(xì)胞操作,,吹打細(xì)胞注意盡量輕柔,不要產(chǎn)生過(guò)多氣泡以免影響細(xì)胞狀態(tài),。
三,、細(xì)胞凍存操作
凍存液配方 :92%FBS+8%DMSO(新手推薦)或92%*培養(yǎng)基+8%DMSO(高手推薦);
凍存規(guī)格 :200-300萬(wàn)/ml,1ml每管
凍存方法 :
1. 離心獲得細(xì)胞沉淀后,,加配置好的凍存液輕輕重懸細(xì)胞,;
2. 將細(xì)胞懸液盡快移入已經(jīng)做好標(biāo)記的凍存管;
3. 將凍存管轉(zhuǎn)入程序凍存盒,,放入-80度冰箱過(guò)夜,,第二天轉(zhuǎn)入液氮保存;沒(méi)有程序凍存盒的實(shí)驗(yàn)室,,加入細(xì)胞后可以將凍存管放在泡沫盒中4度靜置5-10min,,再-20度靜置2h后轉(zhuǎn)入-80度過(guò)夜,第二天轉(zhuǎn)入液氮保存
注意事項(xiàng) :凍存細(xì)胞轉(zhuǎn)入液氮后及時(shí)復(fù)蘇一管檢查細(xì)胞凍存活性,,若有異常,,及時(shí)調(diào)整實(shí)驗(yàn)方案
Tips:
1.細(xì)胞懸浮圓形生長(zhǎng),大聚團(tuán)成葡萄串狀,,偶有散開(kāi)細(xì)胞,;
2.圓形透亮、細(xì)胞膜完整的細(xì)胞是活細(xì)胞,,如果無(wú)法判斷,,可以取少量細(xì)胞用臺(tái)盼藍(lán)染色后計(jì)數(shù)確定細(xì)胞活率;
3.懸浮細(xì)胞密度維持1E5-5E5/ml之間,,密度過(guò)低或者過(guò)高可能會(huì)影響細(xì)胞狀態(tài),;
我們推薦使用尚恩生物Raji(人Burkitt's淋巴瘤細(xì)胞)專用*培養(yǎng)基(產(chǎn)品貨號(hào):SNLM-048)作為體外培養(yǎng)的培養(yǎng)基。