一,、細(xì)胞基本屬性
細(xì)胞名稱 ：人肺腺癌細(xì)胞
細(xì)胞別稱 ：NCI-H1975; H1975; H-1975
細(xì)胞貨號(hào)： SNL-087
細(xì)胞種屬 ：人
生長情況 ：貼壁
培養(yǎng)條件 ：1640+10%FBS+1%雙抗
培養(yǎng)環(huán)境： air, 95%; carbon dioxide (CO2), 5%
二、人肺腺癌細(xì)胞培養(yǎng)操作
換液周期 ：2-3天
培養(yǎng)基體積 ：T25瓶10-12ml,；10cm皿12-15ml
傳代比例： 1:2-1:4（具體情況視細(xì)胞生長速度及密度決定）
傳代方法 ：
1.盡量吸干凈T25瓶原培養(yǎng)基,；
2.加3-4ml 常溫PBS輕輕潤洗細(xì)胞10-20s，吸走潤洗的PBS,；
3.T25瓶加1ml左右胰酶,，輕輕晃動(dòng)培養(yǎng)瓶以使胰酶鋪勻瓶底細(xì)胞層；
4.將培養(yǎng)瓶放入37度培養(yǎng)箱消化,；
5.消化到細(xì)胞間隙變大,，但未*脫落時(shí)加2-3ml*培養(yǎng)基終止胰酶消化；
6.混勻細(xì)胞,，900rpm離心3-5min,，棄上清；
7.加新的*培養(yǎng)基輕輕重懸細(xì)胞,，均勻分到新的培養(yǎng)瓶里,；
8.補(bǔ)足*培養(yǎng)基，將培養(yǎng)瓶放回培養(yǎng)箱靜置培養(yǎng),；
注意事項(xiàng) ：不同品牌胰酶消化時(shí)間差別較大,，注意嚴(yán)格控制消化時(shí)間
消化傳代細(xì)胞時(shí)吹打細(xì)胞注意盡量輕柔，不要產(chǎn)生過多氣泡以免影響細(xì)胞狀態(tài),。
三,、細(xì)胞凍存操作
凍存液配方：92%FBS+8%DMSO(新手推薦)或92%*培養(yǎng)基+8%DMSO(高手推薦);
凍存規(guī)格 ：200-300萬/ml，1ml每管
凍存方法 ：
1. 離心獲得細(xì)胞沉淀后,，加配置好的凍存液輕輕重懸細(xì)胞,；
2. 將細(xì)胞懸液盡快移入已經(jīng)做好標(biāo)記的凍存管；
3. 將凍存管轉(zhuǎn)入程序凍存盒,，放入-80度冰箱過夜,，第二天轉(zhuǎn)入液氮保存；沒有程序凍存盒的實(shí)驗(yàn)室,，加入細(xì)胞后可以將凍存管放在泡沫盒中4度靜置5-10min,，再-20度靜置2h后轉(zhuǎn)入-80度過夜，第二天轉(zhuǎn)入液氮保存
注意事項(xiàng) ：凍存細(xì)胞轉(zhuǎn)入液氮后及時(shí)復(fù)蘇一管檢查細(xì)胞凍存活性,，若有異常,，及時(shí)調(diào)整實(shí)驗(yàn)方案
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