MDA-MB-468（人乳腺癌細胞）是由CailleauR等人于1977年從一位患有轉移性乳腺癌的51歲黑人女性的胸腔積液中分離得到的,。雖然供體組織的G6PD等位基因雜合，但MDA-MB-468細胞始終表現(xiàn)為G6PD A表型,。p53基因273位密碼子存在G→A突變,，從而導致Arg→His替代。每個MDA-MB-468細胞上存在1×10^6個EGF受體,。
一,、細胞基本屬性
細胞名稱 :人乳腺癌細胞
細胞別稱 :MDA-MB-468; MDA-MB 468; MDA-MB468; MDAMB468; MDA-468; MDA468; MB468; MD Anderson-Metastatic Breast-468
細胞貨號 :SNL-057
細胞種屬 :人
生長情況 :貼壁
培養(yǎng)條件: L15+10%FBS+1%雙抗
培養(yǎng)環(huán)境 :air, 100%
二、細胞培養(yǎng)操作
換液周期 :2-3天
培養(yǎng)基體積 :T25瓶10-12ml,；10cm皿12-15ml
傳代比例 :1:2-1:4（具體情況視細胞生長速度及密度決定）
傳代方法 :
1.盡量吸干凈T25瓶原培養(yǎng)基,；
2.加3-4ml 常溫PBS輕輕潤洗細胞10-20s，吸走潤洗的PBS,；
3.T25瓶加1ml左右胰酶,，輕輕晃動培養(yǎng)瓶以使胰酶鋪勻瓶底細胞層；
4.將培養(yǎng)瓶放入37度培養(yǎng)箱消化,；
5.消化到細胞間隙變大,，但未*脫落時加2-3ml*培養(yǎng)基終止胰酶消化；
6.混勻細胞,，900rpm離心3-5min,，棄上清；
7.加新的*培養(yǎng)基輕輕重懸細胞,，均勻分到新的培養(yǎng)瓶里,；
8.補足*培養(yǎng)基，將培養(yǎng)瓶放回培養(yǎng)箱靜置培養(yǎng),；
注意事項 :不同品牌胰酶消化時間差別較大,，注意嚴格控制消化時間
消化傳代細胞時吹打細胞注意盡量輕柔，不要產(chǎn)生過多氣泡以免影響細胞狀態(tài),。
三,、細胞凍存操作
凍存液配方:92%FBS+8%DMSO(新手推薦)或92%*培養(yǎng)基+8%DMSO(高手推薦);
凍存規(guī)格 :200-300萬/ml，1ml每管
凍存方法 :
1.消化并離心獲得細胞沉淀后,，加配置好的凍存液輕輕重懸細胞,；
2.將細胞懸液盡快移入已經(jīng)做好標記的凍存管,；
3.將凍存管轉入程序凍存盒，放入-80度冰箱過夜,，第二天轉入液氮保存,；沒有程序凍存盒的實驗室，加入細胞后可以將凍存管放在泡沫盒中4度靜置5-10min,，再-20度靜置2h后轉入-80度過夜,，第二天轉入液氮保存
注意事項 :凍存細胞轉入液氮后及時復蘇一管檢查細胞凍存活性，若有異常,，及時調整實驗方案
Tips：
1.L15培養(yǎng)基不需要5%二氧化碳,，使用37度培養(yǎng)箱空氣培養(yǎng)即可；
2.細胞生長偏慢,，注意控制細胞密度不要過低,；
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