KGN（人卵巢顆粒細胞）分離自卵巢組織,；卵巢是雌性動物的生殖器官，卵巢的功能是產(chǎn)生卵以及類固醇激素,。卵巢的位置與睪w相同,，僅左側發(fā)育（右側已退化），呈葡萄狀,，均為處于不同發(fā)育時期的卵泡,，卵泡呈黃色，卵巢表面密布血管,。卵巢的大小與年齡和產(chǎn)卵期有關,。
一、細胞基本屬性
細胞名稱 ：人卵巢顆粒細胞
細胞別稱 ：KGN
細胞貨號 ：SNL-218
細胞種屬 ：人
生長情況 ：貼壁
培養(yǎng)條件 ：DMEM/F12+10%FBS+1%雙抗
培養(yǎng)環(huán)境 ：air, 95%; carbon dioxide (CO2), 5%
二,、細胞培養(yǎng)操作
換液周期 ：2-3天
培養(yǎng)基體積 ：T25瓶10-12ml,；10cm皿12-15ml
傳代比例 ：1:2-1:4（具體情況視細胞生長速度及密度決定）
傳代方法 ：
1.盡量吸干凈T25瓶原培養(yǎng)基；
2.加3-4ml 常溫PBS輕輕潤洗細胞10-20s,，吸走潤洗的PBS,；
3.T25瓶加1ml左右胰酶，輕輕晃動培養(yǎng)瓶以使胰酶鋪勻瓶底細胞層；
4.將培養(yǎng)瓶放入37度培養(yǎng)箱消化,；
5.消化到細胞間隙變大，但未*脫落時加2-3ml*培養(yǎng)基終止胰酶消化,；
6.混勻細胞,，900rpm離心3-5min，棄上清,；
7.加新的*培養(yǎng)基輕輕重懸細胞,，均勻分到新的培養(yǎng)瓶里；
8.補足*培養(yǎng)基,，將培養(yǎng)瓶放回培養(yǎng)箱靜置培養(yǎng),；
注意事項 ：不同品牌胰酶消化時間差別較大，注意嚴格控制消化時間
消化傳代細胞時吹打細胞注意盡量輕柔,，不要產(chǎn)生過多氣泡以免影響細胞狀態(tài),。
三、細胞凍存操作
凍存液配方:92%FBS+8%DMSO(新手推薦)或92%*培養(yǎng)基+8%DMSO(高手推薦);
凍存規(guī)格 ：200-300萬/ml,，1ml每管
凍存方法 ：
1.消化并離心獲得細胞沉淀后,，加配置好的凍存液輕輕重懸細胞；
2.將細胞懸液盡快移入已經(jīng)做好標記的凍存管,；
3.將凍存管轉入程序凍存盒,，放入-80度冰箱過夜，第二天轉入液氮保存,；沒有程序凍存盒的實驗室,，加入細胞后可以將凍存管放在泡沫盒中4度靜置5-10min，再-20度靜置2h后轉入-80度過夜,，第二天轉入液氮保存
注意事項 ：凍存細胞轉入液氮后及時復蘇一管檢查細胞凍存活性,，若有異常，及時調(diào)整實驗方案
Tips：
1.細胞對消化操作比較敏感,，消化過度或者吹打力度過大會導致細胞傳代狀態(tài)變差,，無法增殖，注意控制消化時間和吹打力度,；
2.細胞增殖極慢,，傳代建議按1:2進行。
我們推薦使用尚恩生物KGN（人卵巢顆粒細胞）專用*培養(yǎng)基（產(chǎn)品貨號：SNLM-218）作為體外培養(yǎng)KGN（人卵巢顆粒細胞）的培養(yǎng)基,。
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