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一,、細(xì)胞基本屬性
細(xì)胞名稱：U2OS（人骨肉瘤細(xì)胞）
細(xì)胞別稱：U2OS; U-2 Os; U-2OS; U-2-OS; U2-OS; U20-S; U20S;2T
細(xì)胞貨號：SNL-054
細(xì)胞種屬：人
生長情況：貼壁
培養(yǎng)條件：McCoy’s 5a+10%FBS+1%雙抗
培養(yǎng)環(huán)境：air, 95%; carbon dioxide (CO2), 5%
二,、細(xì)胞培養(yǎng)操作
換液周期：2-3天
培養(yǎng)基體積：T25瓶10-12ml；10cm皿12-15ml
傳代比例：1:2-1:4（具體情況視細(xì)胞生長速度及密度決定）
傳代方法;
1.盡量吸干凈T25瓶原培養(yǎng)基,；
2.加3-4ml 常溫PBS輕輕潤洗細(xì)胞10-20s,，吸走潤洗的PBS；
3.T25瓶加1ml左右胰酶，輕輕晃動培養(yǎng)瓶以使胰酶鋪勻瓶底細(xì)胞層,；
4.將培養(yǎng)瓶放入37度培養(yǎng)箱消化,；
5.消化到細(xì)胞間隙變大，但未*脫落時加2-3ml*培養(yǎng)基終止胰酶消化,；
6.混勻細(xì)胞,，900rpm離心3-5min，棄上清,；
7.加新的*培養(yǎng)基輕輕重懸細(xì)胞,，均勻分到新的培養(yǎng)瓶里；
8.補足*培養(yǎng)基,，將培養(yǎng)瓶放回培養(yǎng)箱靜置培養(yǎng),；
注意事項:不同品牌胰酶消化時間差別較大，注意嚴(yán)格控制消化時間
消化傳代細(xì)胞時吹打細(xì)胞注意盡量輕柔,，不要產(chǎn)生過多氣泡以免影響細(xì)胞狀態(tài),。
三、細(xì)胞凍存操作
凍存液配方:92%FBS+8%DMSO(新手推薦)或92%*培養(yǎng)基+8%DMSO(高手推薦);
凍存規(guī)格:200-300萬/ml,，1ml每管
凍存方法,；
1.消化并離心獲得細(xì)胞沉淀后，加配置好的凍存液輕輕重懸細(xì)胞,；
2.將細(xì)胞懸液盡快移入已經(jīng)做好標(biāo)記的凍存管,；
3.將凍存管轉(zhuǎn)入程序凍存盒，放入-80度冰箱過夜,，第二天轉(zhuǎn)入液氮保存,；沒有程序凍存盒的實驗室，加入細(xì)胞后可以將凍存管放在泡沫盒中4度靜置5-10min,，再-20度靜置2h后轉(zhuǎn)入-80度過夜,，第二天轉(zhuǎn)入液氮保存
注意事項：凍存細(xì)胞轉(zhuǎn)入液氮后及時復(fù)蘇一管檢查細(xì)胞凍存活性，若有異常,，及時調(diào)整實驗方案
Tips：
1.細(xì)胞培養(yǎng)時黑點可能會比較多,，具體原因參見培養(yǎng)操作說明2、3條,；

我們推薦使用尚恩生物U2OS（人骨肉瘤細(xì)胞）*培養(yǎng)基（產(chǎn)品貨號：SNLM-054）作為體外培養(yǎng)的培養(yǎng)基,。