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貨物所在地:湖北武漢市
所在地: 武漢市尚恩生物技術(shù)有限公司
更新時間:2024-11-13 21:00:07
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一,、細胞基本屬性 | |
細胞名稱 | 人T細胞白血病細胞 |
細胞別稱 | 6T-CEM |
細胞貨號 | SNL-050 |
細胞種屬 | 人 |
生長情況 | 懸浮 |
培養(yǎng)條件 | 1640+10%FBS+1%雙抗 |
培養(yǎng)環(huán)境 | air, 95%; carbon dioxide (CO2), 5% |
二,、細胞培養(yǎng)操作 | |
換液周期 | 2-3天 |
培養(yǎng)基體積 | T25瓶10-12ml,;10cm皿12-15ml |
傳代比例 | 1:2-1:4(具體情況視細胞生長速度及密度決定) |
傳代方法 | 1.混勻細胞,收集細胞培養(yǎng)基,,900rpm離心3-5min,,棄上清; 2.加新的*培養(yǎng)基輕輕重懸細胞,,均勻分到新的培養(yǎng)瓶里,; 3.補足*培養(yǎng)基,將培養(yǎng)瓶放回培養(yǎng)箱靜置培養(yǎng),; |
注意事項 | 部分懸浮細胞會附著瓶底,,輕輕晃動培養(yǎng)基或者吹打細胞面就會脫落,不需要胰酶消化,。建議使用培養(yǎng)皿培養(yǎng),,更適合吹打細胞操作,吹打細胞注意盡量輕柔,,不要產(chǎn)生過多氣泡以免影響細胞狀態(tài),。 |
三、細胞凍存操作 | |
凍存液配方 | 92%FBS+8%DMSO(新手推薦)或92%*培養(yǎng)基+8%DMSO(高手推薦); |
凍存規(guī)格 | 200-300萬/ml,,1ml每管 |
凍存方法 | 1. 離心獲得細胞沉淀后,加配置好的凍存液輕輕重懸細胞,; 2. 將細胞懸液盡快移入已經(jīng)做好標記的凍存管,; 3. 將凍存管轉(zhuǎn)入程序凍存盒,放入-80度冰箱過夜,,第二天轉(zhuǎn)入液氮保存;沒有程序凍存盒的實驗室,,加入細胞后可以將凍存管放在泡沫盒中4度靜置5-10min,再-20度靜置2h后轉(zhuǎn)入-80度過夜,第二天轉(zhuǎn)入液氮保存 |
注意事項 | 凍存細胞轉(zhuǎn)入液氮后及時復(fù)蘇一管檢查細胞凍存活性,,若有異常,,及時調(diào)整實驗方案 |
Tips:
1.細胞懸浮圓形生長,偶有小聚團,;
2.圓形透亮、細胞膜完整的細胞是活細胞,,如果無法判斷,,可以取少量細胞用臺盼藍染色后計數(shù)確定細胞活率;
3.懸浮細胞密度維持1E5-5E5/ml之間,,密度過低或者過高可能會影響細胞狀態(tài),;
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