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培養(yǎng)環(huán)境air, 95%; carbon dioxide (CO2), 5%

二,、細(xì)胞培養(yǎng)說(shuō)明

1. 細(xì)胞培養(yǎng)需要充足經(jīng)驗(yàn)，新手或者沒(méi)有類似細(xì)胞培養(yǎng)經(jīng)驗(yàn)的人建議在專業(yè)人士指導(dǎo)下進(jìn)行操作,，尤其注意無(wú)菌操作,、貼壁細(xì)胞消化時(shí)間及細(xì)胞培養(yǎng)密度。

2. 部分細(xì)胞在傳代后時(shí)，會(huì)有以下現(xiàn)象：細(xì)胞內(nèi)會(huì)有黑色小點(diǎn),、細(xì)胞間隙有些顆粒物,、培養(yǎng)基漂浮一些死細(xì)胞。以上都是細(xì)胞培養(yǎng)常見(jiàn)現(xiàn)象,，不影響細(xì)胞增殖和實(shí)驗(yàn)。

3. 細(xì)胞內(nèi)的黑色顆粒是細(xì)胞外分泌泡,、細(xì)胞器折光或者細(xì)胞膜表面物質(zhì),，這個(gè)屬于細(xì)胞自身特性，無(wú)法清除也無(wú)法改變,，具體情況可以參考ATCC、DSMZ等大型細(xì)胞庫(kù)細(xì)胞照片,。細(xì)胞外的黑色顆粒大部分是細(xì)胞碎片,，可以吸走培養(yǎng)基后用PBS潤(rùn)洗；潤(rùn)洗不能清除的可以消化細(xì)胞重新接種,，消化完成后加*培養(yǎng)基終止消化,，混勻細(xì)胞，收集細(xì)胞懸液900-1000rpm(約150g)離心3min,，棄上清,。再加5ml PBS重懸細(xì)胞,，再離心后，用*培養(yǎng)基重懸接種到新的培養(yǎng)皿,。第二次PBS重懸是為了去除碎片,，如果平時(shí)碎片比較少,，傳代時(shí)可以省略PBS重懸的步驟；如果碎片很多，建議PBS多洗幾次,。

4. 不同品牌胰M溶液成分不一樣,，消化活性差別比較大，更換胰M品牌時(shí)需重新摸索消化時(shí)間,，以消化到細(xì)胞間隙變大但未漂浮為準(zhǔn),，此時(shí)結(jié)束消化最佳，避免消化過(guò)度導(dǎo)致細(xì)胞死亡,。細(xì)胞消化后比較脆弱,，吹打力度不要過(guò)大，不要產(chǎn)生過(guò)多氣泡,，否則會(huì)嚴(yán)重影響細(xì)胞狀態(tài),。

5. 不同細(xì)胞生長(zhǎng)速度差異較大，所有細(xì)胞收貨后第①次傳代建議按1:2傳代,。正常培養(yǎng)時(shí)生長(zhǎng)較慢,、密度較低的細(xì)胞需要傳代時(shí)按1:2傳代，生長(zhǎng)較快,、密度較高的細(xì)胞可以按1:4傳代,。

6. 細(xì)胞生長(zhǎng)偏慢時(shí)，可以將血清濃度增加到15-20%培養(yǎng)一段時(shí)間,，待細(xì)胞狀態(tài)和生長(zhǎng)速度恢復(fù)正常后換回10%血清