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NAMALWA細胞|ATCC通過STR鑒定

NAMALWA細胞|ATCC通過STR鑒定

---尚恩生物 I8627859203---

二,、細胞培養(yǎng)操作

換液周期：2-3天

培養(yǎng)基體積：T25瓶10-12ml,；10cm皿12-15ml

傳代比例：1:2-1:4（具體情況視細胞生長速度及密度決定）

傳代方法：

1.盡量吸干凈T25瓶原培養(yǎng)基,；

2.加3-4ml 常溫PBS輕輕潤洗細胞10-20s，吸走潤洗的PBS,；

3.T25瓶加1ml左右胰M輕輕晃動培養(yǎng)瓶以使胰M鋪勻瓶底細胞層,；

4.將培養(yǎng)瓶放入37度培養(yǎng)箱消化；

5.消化到細胞間隙變大,，但未*脫落時加2-3ml*培養(yǎng)基終止胰M消化,；

6.混勻細胞，900rpm離心3-5min,，棄上清,；

7.加新的*培養(yǎng)基輕輕重懸細胞，均勻分到新的培養(yǎng)瓶里,；

8.補足*培養(yǎng)基,，將培養(yǎng)瓶放回培養(yǎng)箱靜置培養(yǎng)；

注意事項 不同品牌胰M消化時間差別較大,，注意嚴格控制消化時間

消化傳代細胞時吹打細胞注意盡量輕柔,，不要產(chǎn)生過多氣泡以免影響細胞狀態(tài)。

三,、細胞凍存操作

凍存液配方：92%FBS+8%DMSO(新手建議)或92%*培養(yǎng)基+8%DMSO(高手建議);

凍存規(guī)格：200-300萬/ml,，1ml每管

凍存方法：

1.消化并離心獲得細胞沉淀后，加配置好的凍存液輕輕重懸細胞,；

2.將細胞懸液盡快移入已經(jīng)做好標記的凍存管；

3.將凍存管轉(zhuǎn)入程序凍存盒,，放入-80度冰箱過夜,，第二天轉(zhuǎn)入液氮保存；沒有程序凍存盒的實驗室,，加入細胞后可以將凍存管放在泡沫盒中4度靜置5-10min,，再-20度靜置2h后轉(zhuǎn)入-80度過夜,，第二天轉(zhuǎn)入液氮保存

注意事項 凍存細胞轉(zhuǎn)入液氮后及時復蘇一管檢查細胞凍存活性，若有異常,，及時調(diào)整實驗方案