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-----尚恩生物 I8627859203----
L6大鼠骨骼肌成肌細(xì)胞國(guó)內(nèi)高校合作
L6大鼠骨骼肌成肌細(xì)胞國(guó)內(nèi)高校合作
一,、細(xì)胞基本屬性
細(xì)胞名稱大鼠骨骼肌成肌細(xì)胞
細(xì)胞別稱L6; L-6; L-6 myoblast
細(xì)胞貨號(hào)SNL-030
細(xì)胞種屬大鼠
生長(zhǎng)情況貼壁
培養(yǎng)條件H-DMEM+10%FBS+1%雙抗
培養(yǎng)環(huán)境air, 95%; carbon dioxide (CO2), 5%
二,、細(xì)胞培養(yǎng)操作
換液周期2-3天
培養(yǎng)基體積T25瓶10-12ml;10cm皿12-15ml售后
傳代比例1:2-1:4(具體情況視細(xì)胞生長(zhǎng)速度及密度決定)
傳代方法1.盡量吸干凈T25瓶原培養(yǎng)基,;
2.加3-4ml 常溫PBS輕輕潤(rùn)洗細(xì)胞10-20s,,吸走潤(rùn)洗的PBS;
3.T25瓶加1ml左右胰M,,輕輕晃動(dòng)培養(yǎng)瓶以使胰M鋪勻瓶底細(xì)胞層,;
4.將培養(yǎng)瓶放入37度培養(yǎng)箱消化;
5.消化到細(xì)胞間隙變大,,但未*脫落時(shí)加2-3ml*培養(yǎng)基終止胰M消化,;
6.混勻細(xì)胞,900rpm離心3-5min,,棄上清,;
7.加新的*培養(yǎng)基輕輕重懸細(xì)胞,均勻分到新的培養(yǎng)瓶里,;
8.補(bǔ)足*培養(yǎng)基,,將培養(yǎng)瓶放回培養(yǎng)箱靜置培養(yǎng);
注意事項(xiàng)不同品牌胰M消化時(shí)間差別較大,,注意嚴(yán)格控制消化時(shí)間
消化傳代細(xì)胞時(shí)吹打細(xì)胞注意盡量輕柔,,不要產(chǎn)生過(guò)多氣泡以免影響細(xì)胞狀態(tài)。
三,、細(xì)胞凍存操作
凍存液配方92%FBS+8%DMSO(新手建議)或92%*培養(yǎng)基+8%DMSO(高手建議);
凍存規(guī)格200-300萬(wàn)/ml,,1ml每管
凍存方法1. 離心獲得細(xì)胞沉淀后,加配置好的凍存液輕輕重懸細(xì)胞,;
2. 將細(xì)胞懸液盡快移入已經(jīng)做好標(biāo)記的凍存管,;
3. 將凍存管轉(zhuǎn)入程序凍存盒,放入-80度冰箱過(guò)夜,,第二天轉(zhuǎn)入液氮保存,;沒(méi)有程序凍存盒的實(shí)驗(yàn)室,加入細(xì)胞后可以將凍存管放在泡沫盒中4度靜置5-10min,,再-20度靜置2h后轉(zhuǎn)入-80度過(guò)夜,,第二天轉(zhuǎn)入液氮保存
注意事項(xiàng)凍存細(xì)胞轉(zhuǎn)入液氮后及時(shí)復(fù)蘇一管檢查細(xì)胞凍存活性,若有異常,,及時(shí)調(diào)整實(shí)驗(yàn)方案
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