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HFL1人胚肺成纖維細胞HFL1細胞系

HFL1人胚肺成纖維細胞HFL1細胞系

培養(yǎng)環(huán)境：air, 95%; carbon dioxide (CO2), 5%

二,、收貨處理方式（T25瓶/凍存管）

【T25】

①快遞保存溫度：室溫

②初步平衡：T25瓶表面消毒后，放37度培養(yǎng)箱平衡復(fù)溫2h以上

③處理方式：吸走大部分培養(yǎng)基，留10-12ml培養(yǎng)基，拍照并觀察細胞。密度80%以上即可吸走培養(yǎng)基消化傳代,，若密度低于80%可以留10-12 ml繼續(xù)培養(yǎng)至細胞密度80%以上

④接種方式：T25傳代第①次建議1:2傳代，即瓶T25傳成兩瓶

⑤注意事項：若細胞出現(xiàn)漂浮,，T25瓶不開封,，放至37度培養(yǎng)箱過夜，若細胞貼壁即說明活性正常,，按正常操作消化傳代即可；若未貼壁,，收集細胞培養(yǎng)基離心后,，將細胞重懸接種到新的培養(yǎng)瓶中，同時原瓶還貼壁的細胞加培養(yǎng)基繼續(xù)培養(yǎng)
發(fā)貨T25瓶裝滿大約有75ml培養(yǎng)基,，可以收集起來,，1500rpm離心5min后，取上清4度保存,，用于培養(yǎng)細胞,，以平穩(wěn)過渡到客戶自己的培養(yǎng)基

【凍存管】

①快遞保存溫度：液氮長期保存或-80度3天以內(nèi)

②初步平衡：無須平衡，直接放入-80冰箱或者液氮罐保存

③處理方式：37度水浴搖晃盡快融化細胞,，直接在凍存管內(nèi)將細胞離心,。離心轉(zhuǎn)速以離心力150g(約900rpm)左右，1min為宜,，棄上清,，沉淀用新鮮培養(yǎng)基重懸后接種到10cm培養(yǎng)皿，顯微鏡下觀察細胞并拍照,，24h后換液一次

④接種方式：一管細胞建議接種到10cm培養(yǎng)皿或者T25瓶

⑤注意事項：收貨時若發(fā)現(xiàn)干冰化完,，檢查凍存管是否融化，若已融化需直接離心細胞接種觀察,，若未融化可以將細胞按正常步驟保存,，以上情況及時反饋
干冰發(fā)貨的細胞只能在-80保存3天左右，長時間保存會出現(xiàn)活性下降,。干冰發(fā)貨均為兩支,，客戶先復(fù)蘇一支，若復(fù)蘇失敗及時聯(lián)系我方并在我方指導(dǎo)下復(fù)蘇第二支,。若客戶同時復(fù)蘇兩支均狀態(tài)不佳,，我方將不提供免費售后服務(wù)

特殊情況：

1.若培養(yǎng)瓶或者凍存管出現(xiàn)破碎或漏液情況，及時拍照聯(lián)系銷售反饋,，按指導(dǎo)進行進一步處理,。若只是外包裝破損一般不影響培養(yǎng)瓶和凍存管,，請放心使用。

2.若無法觀察到細胞,，建議收集細胞培養(yǎng)基,，1200rpm離心5min，觀察細胞沉淀量,，并用少量培養(yǎng)基重懸沉淀后,，取部分懸液放到計數(shù)板或者載玻片上觀察細胞。

3.部分細胞增殖較快,，發(fā)貨細胞量較多時,，培養(yǎng)基可能出現(xiàn)顏色變黃現(xiàn)象。繼續(xù)培養(yǎng)使用此類培養(yǎng)基時,，需要及時觀察培養(yǎng)基顏色變化,，縮短培養(yǎng)基換液周期，并每瓶多加2-3ml培養(yǎng)基,。

4.收貨當(dāng)天不處理細胞時,，T25瓶可以消毒拆封口膜后不擰開瓶蓋放37度培養(yǎng)箱靜置過夜，但不建議超過24h,；凍存管可以直接放液氮長期保存或-80度3天以內(nèi),，必須一周內(nèi)復(fù)蘇一只培養(yǎng)檢查，否則將超過一周售后期,。

培養(yǎng)操作說明：

1.細胞培養(yǎng)需要充足經(jīng)驗,，新手或者沒有類似細胞培養(yǎng)經(jīng)驗的人建議在專業(yè)人士指導(dǎo)下進行操作，尤其注意無菌操作,、貼壁細胞消化時間及細胞培養(yǎng)密度,。

2. 部分細胞在傳代后時，會有以下現(xiàn)象：細胞內(nèi)會有黑色小點,、細胞間隙有些顆粒物,、培養(yǎng)基漂浮一些死細胞。以上都是細胞培養(yǎng)常見現(xiàn)象,，不影響細胞增殖和實驗,。

3. 細胞內(nèi)的黑色顆粒是細胞外分泌泡、細胞器折光或者細胞膜表面物質(zhì),，這個屬于細胞自身特性,，無法清除也無法改變，具體情況可以參考ATCC,、DSMZ等大型細胞庫細胞照片,。細胞外的黑色顆粒大部分是細胞碎片，可以吸走培養(yǎng)基后用PBS潤洗；潤洗不能清除的可以消化細胞重新接種,，消化完成后加*培養(yǎng)基終止消化,，混勻細胞，收集細胞懸液900-1000rpm(約150g)離心3min,，棄上清,。再加5ml PBS重懸細胞，再離心后,，用*培養(yǎng)基重懸接種到新的培養(yǎng)皿,。第二次PBS重懸是為了去除碎片，如果平時碎片比較少,，傳代時可以省略PBS重懸的步驟,；如果碎片很多，建議PBS多洗幾次,。

4. 不同品牌胰m溶液成分不一樣,，消化活性差別比較大，更換胰m品牌時需重新摸索消化時間,，以消化到細胞間隙變大但未漂浮為準(zhǔn)，此時結(jié)束消化最佳,，避免消化過度導(dǎo)致細胞死亡,。細胞消化后比較脆弱，吹打力度不要過大,，不要產(chǎn)生過多氣泡,，否則會嚴(yán)重影響細胞狀態(tài)。

5. 不同細胞生長速度差異較大,，所有細胞收貨后第①次傳代建議按1:2傳代,。正常培養(yǎng)時生長較慢、密度較低的細胞需要傳代時按1:2傳代,，生長較快,、密度較高的細胞可以按1:4傳代。

6. 細胞生長偏慢時,，可以將血清濃度增加到15-20%培養(yǎng)一段時間,，待細胞狀態(tài)和生長速度恢復(fù)正常后換回10%血清。