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一、細(xì)胞基本屬性
細(xì)胞名稱：A20（小鼠B細(xì)胞淋巴瘤細(xì)胞）
細(xì)胞別稱：A20
細(xì)胞貨號：SNL-153
細(xì)胞種屬：小鼠
生長情況：半貼壁
培養(yǎng)條件：1640+10%FBS+1%雙抗
培養(yǎng)環(huán)境：air, 95%; carbon dioxide (CO2), 5%
二,、細(xì)胞培養(yǎng)操作
換液周期：2-3天
培養(yǎng)基體積：T25瓶10-12ml,；10cm皿12-15ml
傳代比例：1:2-1:4（具體情況視細(xì)胞生長速度及密度決定）
傳代方法：
1.輕輕吸走培養(yǎng)上清，留2-3ml培養(yǎng)基輕輕吹打細(xì)胞面吹下細(xì)胞,；
2.混勻細(xì)胞,，收集細(xì)胞培養(yǎng)基，900rpm離心3-5min,，棄上清,；
3.加新的*培養(yǎng)基輕輕重懸細(xì)胞，均勻分到新的培養(yǎng)瓶里,；
補(bǔ)足*培養(yǎng)基,，將培養(yǎng)瓶放回培養(yǎng)箱靜置培養(yǎng)；
注意事項(xiàng)：半貼壁細(xì)胞會附著瓶底,，但貼壁不緊,，輕輕吸取培養(yǎng)基輕輕吹打細(xì)胞面就會脫落，不需要胰M消化,。建議使用培養(yǎng)皿培養(yǎng),，更適合吹打細(xì)胞操作，吹打細(xì)胞注意盡量輕柔,，不要產(chǎn)生過多氣泡以免影響細(xì)胞狀態(tài),。
三,、細(xì)胞凍存操作
凍存液配方：92%FBS+8%DMSO(新手推薦)或92%*培養(yǎng)基+8%DMSO(高手推薦);
凍存規(guī)格：200-300萬/ml，1ml每管
凍存方法：
1.離心獲得細(xì)胞沉淀后,，加配置好的凍存液輕輕重懸細(xì)胞,；
2.將細(xì)胞懸液盡快移入已經(jīng)做好標(biāo)記的凍存管；
將凍存管轉(zhuǎn)入程序凍存盒,，放入-80度冰箱過夜,，第二天轉(zhuǎn)入液氮保存；沒有程序凍存盒的實(shí)驗(yàn)室,，加入細(xì)胞后可以將凍存管放在泡沫盒中4度靜置5-10min,，再-20度靜置2h后轉(zhuǎn)入-80度過夜，第二天轉(zhuǎn)入液氮保存
注意事項(xiàng)：凍存細(xì)胞轉(zhuǎn)入液氮后及時(shí)復(fù)蘇一管檢查細(xì)胞凍存活性,，若有異常,，及時(shí)調(diào)整實(shí)驗(yàn)方案
Tips：
1.細(xì)胞半貼壁圓形生長，部分懸浮圓形,，傳代時(shí)均可收集培養(yǎng),，換液時(shí)將懸浮細(xì)胞離心收集后重新接回原瓶，若貼壁細(xì)胞較多活性較好時(shí)可以不要懸浮的細(xì)胞,；
2.傳代有部分細(xì)胞碎片可以換液后用PBS潤洗細(xì)胞清除,，使用的PBS需要恢復(fù)到室溫，加入時(shí)不要沖到細(xì)胞面,，潤洗盡量輕柔,；
3.該細(xì)胞生長較快，培養(yǎng)基消耗較快,，培養(yǎng)時(shí)注意密切關(guān)注細(xì)胞狀態(tài),，密度較高、培養(yǎng)基有變黃趨勢時(shí)及時(shí)換液避免細(xì)胞狀態(tài)變差,；

我們推薦使用尚恩生物A20（小鼠B細(xì)胞淋巴瘤細(xì)胞）*培養(yǎng)基（產(chǎn)品貨號：SNLM-153）作為體外培養(yǎng)的培養(yǎng)基,。