一,、細胞基本屬性
細胞名稱： BEL-7404（人肝癌細胞）
細胞別稱： Bel-7404; BEL 7404; Bel 7404; BEL7404; Bel7404; 7404
細胞貨號： SNL-144
細胞種屬 ：人
生長情況 ：貼壁
培養(yǎng)條件 ：1640+10%FBS+1%雙抗
培養(yǎng)環(huán)境 ：air, 95%; carbon dioxide (CO2), 5%
二,、細胞培養(yǎng)操作
換液周期 ：2-3天
培養(yǎng)基體積： T25瓶10-12ml；10cm皿12-15ml
傳代比例 ：1:2-1:4（具體情況視細胞生長速度及密度決定）
傳代方法：
1.盡量吸干凈T25瓶原培養(yǎng)基；
2.加3-4ml 常溫PBS輕輕潤洗細胞10-20s,，吸走潤洗的PBS,；
3.T25瓶加1ml左右胰m，輕輕晃動培養(yǎng)瓶以使胰m鋪勻瓶底細胞層,；
4.將培養(yǎng)瓶放入37度培養(yǎng)箱消化,；
5.消化到細胞間隙變大，但未*脫落時加2-3ml*培養(yǎng)基終止胰m消化,；
6.混勻細胞,，900rpm離心3-5min，棄上清,；
7.加新的*培養(yǎng)基輕輕重懸細胞,，均勻分到新的培養(yǎng)瓶里；
8.補足*培養(yǎng)基,，將培養(yǎng)瓶放回培養(yǎng)箱靜置培養(yǎng),；
注意事項 ：不同品牌胰m消化時間差別較大，注意嚴格控制消化時間
消化傳代細胞時吹打細胞注意盡量輕柔,，不要產生過多氣泡以免影響細胞狀態(tài),。
三、細胞凍存操作
凍存液配方： 92%FBS+8%DMSO(新手推薦)或92%*培養(yǎng)基+8%DMSO(高手推薦);
凍存規(guī)格： 200-300萬/ml,，1ml每管
凍存方法：
1.消化并離心獲得細胞沉淀后,，加配置好的凍存液輕輕重懸細胞；
2.將細胞懸液盡快移入已經做好標記的凍存管,；
3.將凍存管轉入程序凍存盒,，放入-80度冰箱過夜，第二天轉入液氮保存,；沒有程序凍存盒的實驗室,，加入細胞后可以將凍存管放在泡沫盒中4度靜置5-10min，再-20度靜置2h后轉入-80度過夜,，第二天轉入液氮保存
注意事項 ：凍存細胞轉入液氮后及時復蘇一管檢查細胞凍存活性,，若有異常，及時調整實驗方案
我們推薦使用尚恩生物*培養(yǎng)基（產品貨號：SNLM-144）作為體外培養(yǎng)BEL-7404（人肝癌細胞）的培養(yǎng)基,。
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