143B人骨肉瘤細胞培養(yǎng)條件與操作規(guī)范：
1. 培養(yǎng)基與環(huán)境
基礎培養(yǎng)基：DMEM或MEM，補充10%胎牛血清(FBS),、1%雙抗(青霉素/鏈霉素),。
培養(yǎng)條件：37℃、5% CO?,、飽和濕度,，培養(yǎng)箱濕度建議70%-80%。
容器適配：T25瓶(8-10mL培養(yǎng)基),、10cm皿(12-15mL),，根據(jù)細胞密度調(diào)整換液頻率(每2-3天一次)。
2. 關(guān)鍵操作步驟
復蘇：
37℃水浴快速解凍,，離心(1000rpm,，3-5min)去除凍存液。
新鮮培養(yǎng)基重懸后接種,，次日觀察細胞貼壁情況,。
傳代：
密度達80%-90%時，用0.25%胰酶-EDTA消化1-2分鐘,，顯微鏡下觀察細胞間隙變大即終止消化,。
傳代比例1:2至1:4,，輕柔吹打避免氣泡，維持細胞活性,。
凍存：
凍存液配方：90% FBS + 10% DMSO,，密度0.5-1×10?細胞/mL。
程序降溫盒-80℃過夜后轉(zhuǎn)液氮,，需復蘇驗證活性,。
3. 質(zhì)量控制
鑒定與檢測：定期進行STR鑒定和支原體檢測，確保遺傳背景穩(wěn)定且無污染,。
狀態(tài)監(jiān)測：傳代后鏡檢并拍照記錄,，觀察細胞形態(tài)及碎片情況，及時清理死細胞,。
5
立即詢價
您提交后,，專屬客服將第一時間為您服務