同學(xué)們有沒有遇到這種情況：辛辛苦苦培養(yǎng)了一批貼壁細(xì)胞，正準(zhǔn)備美美地做實(shí)驗(yàn),，有一天突然發(fā)現(xiàn)細(xì)胞變少了,！細(xì)胞并不是消失了，而是在培養(yǎng)液中大量漂浮著,，像一群失去了方向的氣球,。你不知道該怎么辦，只能無(wú)奈地看著細(xì)胞越養(yǎng)越少,。別擔(dān)心,，小尚會(huì)告訴你原因和解決方法，建議速速放入收藏夾以備不時(shí)之需,！
首先,，同學(xué)們需要了解，細(xì)胞漂浮是一個(gè)很常見的現(xiàn)象,，細(xì)胞培養(yǎng)時(shí)有部分漂浮但細(xì)胞仍然正常生長(zhǎng),，這種情況無(wú)需特殊處理,。特別是呈島狀生長(zhǎng)的細(xì)胞，漂浮細(xì)胞看起來(lái)會(huì)比較多,，保持2-3天換液一次即可,，換液的同時(shí)漂浮細(xì)胞順便也被清除了。
但如果細(xì)胞突然大量漂浮,，貼壁的部分明顯減少,，細(xì)胞不再生長(zhǎng)，則需要按照下面的內(nèi)容排查原因并正確處理,。
看起來(lái)漂浮細(xì)胞較多,，但貼壁細(xì)胞正常生長(zhǎng)，并沒有受到影響,，正常培養(yǎng)即可
細(xì)胞大量異常漂浮,，貼壁細(xì)胞狀態(tài)不佳，需排查原因
1. 溫度影響
細(xì)胞不能著涼哦,！貼壁比較弱的細(xì)胞如果遇到了冷的環(huán)境,，會(huì)皺縮甚至脫落，換液等操作之前必須將培養(yǎng)基,、PBS等試劑置于37度充分預(yù)熱,。細(xì)胞不能靠近冰冷的物品，不要將剛從冰箱拿出的物品放在細(xì)胞旁邊,。冬季尤其需要注意,，未開空調(diào)的細(xì)胞房氣溫較低，細(xì)胞拿出培養(yǎng)箱觀察的時(shí)間不能太長(zhǎng),，否則長(zhǎng)時(shí)間在低溫環(huán)境下細(xì)胞也容易皺縮脫落,。盡量控制觀察次數(shù)，不要太頻繁,。
2. 傳代操作的影響
若消化操作不當(dāng),，細(xì)胞極易受損，最終死亡漂浮,。細(xì)胞在傳代消化的時(shí)候應(yīng)該注意中和的時(shí)機(jī),。一般消化時(shí)每隔30s-1min拿出觀察，直到部分細(xì)胞能自然脫落時(shí)再終止消化,。避免消化不C底,，強(qiáng)行將細(xì)胞吹下造成損傷，同時(shí)也避免消過(guò)度造成損傷,。中和吹打時(shí)注意槍頭不要與細(xì)胞層接觸,，離心重懸時(shí)吹打次數(shù)不宜過(guò)多，力度要輕柔,，吹打時(shí)可留少許液體在槍頭內(nèi),，避免產(chǎn)生氣泡,。
終止消化的時(shí)機(jī)
（重懸吹打教學(xué)視頻）
3. 培養(yǎng)基與血清的影響
若培養(yǎng)基、血清等培養(yǎng)試劑開封時(shí)間較長(zhǎng),，培養(yǎng)箱CO2供氣異常等情況,，可能導(dǎo)致培養(yǎng)基pH值、滲透壓異常,、細(xì)胞因子降解等種種問題,，從而導(dǎo)致細(xì)胞漂浮。
建議培養(yǎng)試劑開封后正確分裝儲(chǔ)存,，并盡快使用,。
血清對(duì)細(xì)胞貼壁起著至關(guān)重要的影響，血清不合適也可能導(dǎo)致細(xì)胞過(guò)多漂浮,，此時(shí)應(yīng)嘗試不同品牌的血清,，選擇出最合適的血清進(jìn)行細(xì)胞培養(yǎng)。
CO2細(xì)胞培養(yǎng)箱要定期維護(hù),，保證細(xì)胞生長(zhǎng)環(huán)境穩(wěn)定,。
4. 細(xì)胞密度影響
細(xì)胞密度過(guò)低或過(guò)高都可能影響細(xì)胞貼壁，過(guò)低時(shí)細(xì)胞生長(zhǎng)減慢甚至無(wú)法生長(zhǎng)最終漂??；細(xì)胞長(zhǎng)滿后未及時(shí)傳代，長(zhǎng)時(shí)間高密度培養(yǎng),，細(xì)胞將會(huì)受損漂浮。因此要注意接種密度不要過(guò)低,，密度至80%及時(shí)傳代,。
密度過(guò)低
密度過(guò)高
5. 培養(yǎng)器皿的影響
一般來(lái)說(shuō)，培養(yǎng)貼壁細(xì)胞需要使用表面處理過(guò)的器皿,。所謂表面處理,，就是通過(guò)特定的方法使器皿底部具有親水性，有效提高細(xì)胞的貼壁性,，大家購(gòu)買培養(yǎng)器皿的時(shí)候需要多多留心,。如果細(xì)胞貼壁太弱了，一碰就脫落,，可以嘗試用多聚賴氨酸,、膠原蛋白等物質(zhì)包被培養(yǎng)器皿，以增加細(xì)胞貼壁牢固度,。
總之,，如果發(fā)現(xiàn)細(xì)胞大量異常漂浮，排查原因并盡快處理通?？梢越鉀Q,。
希望這篇文章對(duì)你有所幫助!
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