--細 胞 基 本 信 息---

細胞名稱： AR42J(大鼠胰腺外分泌細胞)

細胞別稱： AR4-2J; AR-42J

細胞貨號： SNL-207

生長特性： 貼壁

培養(yǎng)條件： DMEM+20% FBS+1% P/S

培養(yǎng)環(huán)境： 空氣,，95%； 二氧化碳 (CO₂)，5%,；37℃

細胞簡介： AR42J細胞是從患有腫瘤的大鼠胰腺中分離的上皮樣細胞,。AR42J細胞是一種外分泌細胞，具有淀粉酶和其它外分泌酶,，具有胰島素受體和糖皮質(zhì)激素受體,。AR42J細胞分泌活動可由糖皮質(zhì)激素刺激誘導(dǎo)，同時出現(xiàn)廣泛的內(nèi)質(zhì)網(wǎng)重構(gòu),。AR42J細胞可以用于3D細胞培養(yǎng),，也是一種合適的轉(zhuǎn)染宿主。

細胞正常生長形態(tài)照片

AR42J細胞培養(yǎng)注意事項

1. 聚集貼壁生長

AR42J細胞聚集成簇貼壁生長,，難以完*匯合至100%。實際細胞密度比觀察密度要大,，團塊較大時需要及時傳代,，避免細胞密度過大導(dǎo)致營養(yǎng)不足而狀態(tài)變差。

2. 生長緩慢

AR42J細胞生長較慢,，建議使用20% 血清培養(yǎng),。接種密度過低時細胞生長速度將會更慢，推薦傳代比例1：2,。

3. 碎片較多

AR42J細胞培養(yǎng)時背景中可能有細胞碎片和黑點,，一般不影響細胞生長。若細胞碎片較多可以通過PBS潤洗或換液清除,。如果黑點較多同時出現(xiàn)細胞變形,、大量死亡或不生長的情況，應(yīng)該考慮操作不當導(dǎo)致細胞受損或者存在支原體污染,。

4. 貼壁較弱

AR42J細胞貼壁較弱,，傳代時注意消化時間，避免消化過度,。接種后靜置培養(yǎng),，不頻繁擾動細胞。若培養(yǎng)瓶本身無法支持細胞貼壁生長,，建議對培養(yǎng)瓶提前包被后再用于培養(yǎng)該細胞,。

5. 細胞對血清要求較高

建議使用經(jīng)過培養(yǎng)篩選的專用培養(yǎng)基及血清，血清品質(zhì)對該細胞生長影響甚大,。

AR42J細胞傳代方法

1. 準備所需的培養(yǎng)基,、胰酶、PBS,、離心管,、培養(yǎng)瓶以及無菌槍頭等；（試劑提前預(yù)熱）

2. 抽走培養(yǎng)瓶內(nèi)培養(yǎng)基，加5mL PBS潤洗1-2遍,，清除殘留培養(yǎng)基,；

3. 盡量吸干潤洗的PBS后加1mL胰酶，搖晃使胰酶均勻覆蓋瓶底,，放置培養(yǎng)箱37℃消化適當時間,，鏡下可見細胞明顯回縮，部分細胞開始脫落時立即加入3-4mL含血清的培養(yǎng)基終止消化,，吹落貼壁的細胞,；

Tips：注意控制吹打力度輕柔，吹打次數(shù)不可過多,，避免機械損傷

4. 將細胞懸液轉(zhuǎn)移至離心管中,，1000rpm，3min離心收集細胞,；

5. 在新的培養(yǎng)瓶中加入適量新鮮培養(yǎng)基,；（T25推薦10mL，T75推薦20mL）

6. 離心完成后,，棄上清,，加入適量新鮮培養(yǎng)基輕輕重懸吹散細胞，將細胞懸液均勻接種至培養(yǎng)瓶中,，十字法或8字法混勻,，然后放入培養(yǎng)箱中繼續(xù)培養(yǎng)，注意培養(yǎng)瓶蓋透氣,；

Tips：推薦傳代比例1:2

AR42J細胞凍存方法

1. 配制程序性凍存液,，準備相應(yīng)數(shù)量凍存管并做好標記。

Tips：推薦凍存液配方92%FBS+8%DMSO或92%完*培養(yǎng)基+8%DMSO

2. 先將細胞按傳代步驟消化,、離心,、棄上清，獲得細胞沉淀,；

3. 加入適量程序性凍存液輕輕重懸細胞,，并將細胞懸液轉(zhuǎn)移至凍存管中；

4. 將凍存管放入程序性凍存盒,，放入-80℃冰箱過夜,；

5. 轉(zhuǎn)移凍存細胞至液氮保存并登記細胞保存位置

Tips：

l 液氮保存24h后建議復(fù)蘇一管檢測凍存細胞的活性，若活性合格即可長期保存,。

l 程序性凍存液需要配合程序性凍存盒使用,，若使用非程序凍存液請按產(chǎn)品說明書處理降溫過程。

l T25培養(yǎng)瓶長滿通?？蓛龃?-3管,，10cm皿長滿通?？蓛龃?-4管。

l 凍存密度低將導(dǎo)致復(fù)蘇后細胞狀態(tài)不佳,。

AR42J細胞復(fù)蘇方法

1. 提前將水浴鍋預(yù)熱至37℃,，培養(yǎng)基復(fù)溫至室溫或37℃，離心機設(shè)置好轉(zhuǎn)速,；

2. 將細胞從液氮罐中取出,，觀察管內(nèi)無液氮的情況下，捏住管蓋,，將細胞凍存部分浸入水浴鍋迅速搖晃,，細胞融化至米粒大小冰塊時終止水浴，融化過程不超過2min,；

Tips：

l 若液氮或冰箱距離細胞房較遠,，細胞需要放在干冰或冰盒上運送至細胞房。

l 凍存管在液氮長期保存過程中難免滲入液氮,，取出細胞時震動不要過大,。水浴前一定要觀察管內(nèi)是否存在液氮，若有液氮需靜置一會待液氮完*蒸發(fā)后再水浴,。做好防護，避免凍存管炸開導(dǎo)致受傷,。

l 水浴時使用一次性PE手套包住凍存管避免直接接觸水源,，避免污染。

3. 直接將凍存管以離心力150g(約900rpm)左右離心2min,，不同離心機具體轉(zhuǎn)速會有差異

4. 離心完成后棄上清,，用預(yù)熱的培養(yǎng)基緩慢加入凍存管，輕柔重懸細胞后接種至培養(yǎng)瓶中,，輕輕混勻后放入培養(yǎng)箱,；

5. 復(fù)蘇24小時后觀察細胞貼壁情況。

Tips：

1. 整個細胞復(fù)蘇過程在盡可能5-10min內(nèi)完成,。

2. 該細胞貼壁需要穩(wěn)定的環(huán)境,，復(fù)蘇完成后請勿頻繁將細胞拿出觀察。

AR42J細胞收貨攻略

l 常溫細胞

1. 收貨后,，拆開外包裝,，用75%酒精消毒T25瓶表面，放37℃培養(yǎng)箱靜置4h以上,；

2. 吸走大部分培養(yǎng)基并留10-12 mL,，顯微鏡下拍照保存細胞狀態(tài)照片，觀察細胞密度,，若細胞密度大于80%即可按比例傳代（首*傳代比例建議1：2）,，若細胞密度低于70%可以留10-12 mL繼續(xù)培養(yǎng)至細胞密度80%以上再進行傳代培養(yǎng),；

l 凍存細胞

1. 細胞收貨后盡快開箱檢查，若干冰充足可以取出細胞迅速置于-80℃冰箱（2-3天內(nèi)復(fù)蘇）短期保存或液氮中長期保存,，若干冰完*揮發(fā)建議立即復(fù)蘇細胞并聯(lián)系銷售人員解決,；

2. 凍存細胞建議盡快復(fù)蘇一管培養(yǎng)檢查，以免超出售后期,，復(fù)蘇步驟參考復(fù)蘇攻略,；

3. 復(fù)蘇一管細胞出現(xiàn)異常及時聯(lián)系銷售人員，在專業(yè)技術(shù)支持的指導(dǎo)下進行下一步操作,；

Tips：

1. 細胞收貨出現(xiàn)漏液,、培養(yǎng)瓶破損、干冰完*揮發(fā)等異常情況時,，及時拍照聯(lián)系銷售人員,；

2. 尚恩生物T25瓶發(fā)貨的細胞內(nèi)含對應(yīng)細胞的完*培養(yǎng)基，可以收集原裝培養(yǎng)瓶內(nèi)培養(yǎng)基經(jīng)1500rpm離心5min后,，取上清于4℃保存用于后續(xù)細胞培養(yǎng),；

常見問題及解決方案

細胞密度怎么計算的？

嚴格意義上,，細胞密度需要收集細胞懸液計數(shù)細胞數(shù)量,，但在實際培養(yǎng)過程中，并不需要為了精確控制細胞數(shù)量而消化細胞計數(shù),。因此,，常用的細胞密度指細胞相對于最大生長密度的比值，貼壁細胞可以粗略的用細胞所占培養(yǎng)容器底面積百分比表示,，即顯微鏡下觀察培養(yǎng)容器底部,，有細胞的區(qū)域占總區(qū)域的百分比值，當然這種表達方式受限于單個細胞生長不同密度時所占面積不同導(dǎo)致并不嚴謹,，但也是相當直觀,、簡便的表現(xiàn)細胞狀態(tài)的一種方式。

NO.2培養(yǎng)過程中細胞碎片較多怎么處理,？

1. 細胞內(nèi)的黑色顆粒是細胞外分泌泡及細胞器折光,，這個屬于細胞自身特性，無法清除也無法改變,，大部分細胞都會有這種現(xiàn)象,，只是不同細胞顆粒多少有區(qū)別，細胞培養(yǎng)體系不適應(yīng),、營養(yǎng)缺乏,、滲透壓異常等均可能導(dǎo)致細胞內(nèi)顆粒增加，建議使用合適的培養(yǎng)條件,。

2. 細胞外的黑色顆粒大部分是細胞碎片和細胞代謝產(chǎn)物,，可以先吸走培養(yǎng)基后用PBS潤洗清除,，再加新的培養(yǎng)基繼續(xù)培養(yǎng)。潤洗不能清除的可以換液清洗后等細胞密度70-80%左右消化處理細胞,，消化完成后加完*培養(yǎng)基終止消化,，混勻細胞，收集細胞懸液900-1000rpm(約150g)離心3min,，棄上清,。再加5mL PBS重懸細胞，再離心后,，用完*培養(yǎng)基重懸接種到新的培養(yǎng)皿,。第二次PBS重懸是為了去除碎片，如果平時碎片比較少,，傳代時可以省略PBS重懸的步驟,；如果碎片很多，建議PBS多洗幾次,。

NO.3細胞具體消化時間是多久,？

每個實驗室用的胰酶活力及消化步驟、試劑都是不一樣的,，不能完*規(guī)定消化時間,，以實際消化效果和實驗經(jīng)驗為準。 

產(chǎn)品推薦：

【SNL-207】 AR42J(大鼠胰腺外分泌細胞) (種屬鑒定正確)

【SNLM-207】AR42J細胞專用完*培養(yǎng)基