--細 胞 基 本 信 息---

細胞名稱： MDA-MB-231(人乳腺癌細胞)

細胞別稱： MDA-MB 231; MDA.MB.231; MDA MB 231; MDA MB231; MDA Mb231; MDA-MB231; MDAMB-231; MDAMB231; MDA-231; MDA231; MB231; MD Anderson-Metastatic Breast-231

細胞貨號： SNL-073

生長特性： 貼壁

培養(yǎng)條件： L15+10% FBS+1% P/S

培養(yǎng)環(huán)境： 空氣,，100%； 37℃

細胞簡介： MDA-MB-231細胞來自患有轉(zhuǎn)移性乳腺腺癌的51歲女性病人的胸水,，在裸鼠和ALS處理的BALB/c小鼠中,，MDA-MB-231細胞能形成低分化腺癌（III級）。MDA-MB-231細胞表達EGF,、TGF-α,、表達WNT7B癌基因。MDA-MB-231細胞是一種合適的轉(zhuǎn)染宿主,。

細胞正常生長形態(tài)照 

MDA-MB-231細胞培養(yǎng)注意事項

l 使用L15培養(yǎng)基時不可通入二氧化碳

Leibovitzs-15（L15）培養(yǎng)基的緩沖系統(tǒng)由磷酸鹽和游離堿基氨基酸組成,，代替了傳統(tǒng)的碳酸氫鈉緩沖系統(tǒng)，因此適合于空氣培養(yǎng)環(huán)境,。若您使用L15培養(yǎng)基培養(yǎng)MDA-MB-231,，培養(yǎng)箱不可通入CO2；如果必須要通CO2,，可使用密閉蓋培養(yǎng)瓶,。

l 可用DMEM代替L15

MDA-MB-231細胞可以用DMEM+10%FBS+1%PS培養(yǎng)體系，若要從L15培養(yǎng)體系替換為DMEM,，直接換即可,，無需將兩種培養(yǎng)基混合過渡。DMEM含碳酸氫鈉緩沖系統(tǒng),，使用時需要通入5% CO2,。

l 細胞生長較慢

MDA-MB-231細胞生長偏慢，注意控制細胞接種密度不要過低。推薦傳代比例為1：2,。

l 對機械損傷敏感

MDA-MB-231細胞在消化吹打時易受損,，需要精細的控制消化操作，吹打次數(shù)不宜過多,，控制吹打力度輕柔,。若控制不好，會導(dǎo)致細胞形態(tài)異常,、生長速度減慢甚至無法繼續(xù)傳代培養(yǎng),。（詳細傳代步驟見下文）

MDA-MB-231細胞傳代方法

1. 準備所需的培養(yǎng)基、胰酶,、PBS,、離心管、培養(yǎng)瓶以及無菌槍頭等,；（試劑提前預(yù)熱）

2. 抽走培養(yǎng)瓶內(nèi)培養(yǎng)基,，加5mL PBS潤洗1-2遍，清除殘留培養(yǎng)基,；

3. 盡量吸干潤洗的PBS后加1mL胰酶,，搖晃使胰酶均勻覆蓋瓶底，放置培養(yǎng)箱37℃消化,；

4. 消化時每隔30s拿出來觀察,，消化到細胞明顯回縮，間隙變大,，但未完*脫落時立即加入3-4mL含血清的培養(yǎng)基終止消化,，吹落貼壁的細胞；

Tips：注意控制吹打力度輕柔,，吹打次數(shù)不可過多,，避免機械損傷

5. 將細胞懸液轉(zhuǎn)移至離心管中，1000rpm,，3min離心收集細胞,；

6. 在新的培養(yǎng)瓶中加入適量新鮮培養(yǎng)基；（T25推薦10mL,，T75推薦20mL）

7. 離心完成后,，棄上清，加入適量新鮮培養(yǎng)基輕輕重懸吹散細胞,，將細胞懸液均勻接種至培養(yǎng)瓶中,，十字法或8字法混勻，然后放入培養(yǎng)箱中繼續(xù)培養(yǎng),，注意培養(yǎng)瓶蓋透氣,；

Tips：首*傳代建議1:2,。細胞生長至80%密度時即可傳代

MDA-MB-231細胞凍存方法

1. 配制程序性凍存液，準備相應(yīng)數(shù)量凍存管并做好標記,。

Tips：推薦凍存液配方92%FBS+8%DMSO或92%完*培養(yǎng)基+8%DMSO

2. 先將細胞按傳代步驟消化,、離心、棄上清,，獲得細胞沉淀；

3. 加入適量程序性凍存液輕輕重懸細胞,，并將細胞懸液轉(zhuǎn)移至凍存管中,；

4. 將凍存管放入程序性凍存盒，放入-80℃冰箱過夜,；

5. 轉(zhuǎn)移凍存細胞至液氮保存并登記細胞保存位置

Tips：

l 液氮保存24h后建議復(fù)蘇一管檢測凍存細胞的活性,，若活性合格即可長期保存。

l 程序性凍存液需要配合程序性凍存盒使用,，若使用非程序凍存液請按產(chǎn)品說明書處理降溫過程,。

l T25培養(yǎng)瓶長滿通常可凍存2-3管,，10cm皿長滿通?？蓛龃?-4管。

l 凍存密度低將導(dǎo)致復(fù)蘇后細胞狀態(tài)不佳,。

MDA-MB-231細胞復(fù)蘇方法

1. 提前將水浴鍋預(yù)熱至37℃,，培養(yǎng)基復(fù)溫至室溫或37℃，離心機設(shè)置好轉(zhuǎn)速,；

2. 將細胞從液氮罐取中出,，觀察管內(nèi)無液氮的情況下，捏住管蓋,，將細胞凍存部分浸入水浴鍋迅速搖晃,，細胞融化至米粒大小冰塊時終止水浴，融化過程不超過2min,；

Tips：

l 若液氮或冰箱距離細胞房較遠,，細胞需要放在干冰或冰盒上運送至細胞房。

l 凍存管在液氮長期保存過程中難免滲入液氮,，取出細胞時震動不要過大,。水浴前一定要觀察管內(nèi)是否存在液氮，若有液氮需靜置一會待液氮完*蒸發(fā)后再水浴,。做好防護,，避免凍存管炸開導(dǎo)致受傷。

l 水浴時使用一次性PE手套包住凍存管避免直接接觸水源,，避免污染,。

3. 直接將凍存管以離心力150g(約900rpm)左右離心2min，不同離心機具體轉(zhuǎn)速會有差異

4. 離心完成后棄上清，用預(yù)熱的培養(yǎng)基緩慢加入凍存管,，輕柔重懸細胞后接種至培養(yǎng)瓶中,，輕輕混勻后放入培養(yǎng)箱；

5. 復(fù)蘇24h后觀察并換液一次,，放回培養(yǎng)箱繼續(xù)培養(yǎng),。

Tips：整個細胞復(fù)蘇過程在盡可能5-10min內(nèi)完成。

MDA-MB-231細胞收貨攻略

l 常溫細胞

1. 收貨后,，拆開外包裝,，用75%酒精消毒T25瓶表面，放37℃培養(yǎng)箱靜置4h以上,；

2. 吸走大部分培養(yǎng)基并留10-12 mL,，顯微鏡下拍照保存細胞狀態(tài)照片，觀察細胞密度,，若細胞密度大于80%即可按比例傳代（首*傳代比例建議1：2）,，若細胞密度低于70%可以留10-12 mL繼續(xù)培養(yǎng)至細胞密度80%以上再進行傳代培養(yǎng)；

l 凍存細胞

1. 細胞收貨后盡快開箱檢查,，若干冰充足可以取出細胞迅速置于-80℃冰箱（2-3天內(nèi)復(fù)蘇）短期保存或液氮中長期保存,，若干冰完*揮發(fā)建議立即復(fù)蘇細胞并聯(lián)系銷售人員解決；

2. 凍存細胞建議盡快復(fù)蘇一管培養(yǎng)檢查,，以免超出售后期,，復(fù)蘇步驟參考復(fù)蘇攻略；

3. 復(fù)蘇一管細胞出現(xiàn)異常及時聯(lián)系銷售人員,，在專業(yè)技術(shù)支持的指導(dǎo)下進行下一步操作,；

Tips：

1. 細胞收貨出現(xiàn)漏液、培養(yǎng)瓶破損,、干冰完*揮發(fā)等異常情況時,，及時拍照聯(lián)系銷售人員；

2. 尚恩生物T25瓶發(fā)貨的細胞內(nèi)含對應(yīng)細胞的完*培養(yǎng)基,，可以收集原裝培養(yǎng)瓶內(nèi)培養(yǎng)基經(jīng)1500rpm離心5min后,，取上清于4℃保存用于后續(xù)細胞培養(yǎng)；

常見問題及解決方案

細胞密度怎么計算的,？

嚴格意義上,，細胞密度需要收集細胞懸液計數(shù)細胞數(shù)量，但在實際培養(yǎng)過程中,，并不需要為了精確控制細胞數(shù)量而消化細胞計數(shù),。因此，常用的細胞密度指細胞相對于最大生長密度的比值,，貼壁細胞可以粗略的用細胞所占培養(yǎng)容器底面積百分比表示,，即顯微鏡下觀察培養(yǎng)容器底部,，有細胞的區(qū)域占總區(qū)域的百分比值，當然這種表達方式受限于單個細胞生長不同密度時所占面積不同導(dǎo)致并不嚴謹,，但也是相當直觀,、簡便的表現(xiàn)細胞狀態(tài)的一種方式。

NO.2培養(yǎng)過程中細胞碎片較多怎么處理,？

1. 細胞內(nèi)的黑色顆粒是細胞外分泌泡及細胞器折光,，這個屬于細胞自身特性，無法清除也無法改變,，大部分細胞都會有這種現(xiàn)象,，只是不同細胞顆粒多少有區(qū)別，細胞培養(yǎng)體系不適應(yīng),、營養(yǎng)缺乏、滲透壓異常等均可能導(dǎo)致細胞內(nèi)顆粒增加,，建議使用合適的培養(yǎng)條件,。

2. 細胞外的黑色顆粒大部分是細胞碎片和細胞代謝產(chǎn)物，可以先吸走培養(yǎng)基后用PBS潤洗清除,，再加新的培養(yǎng)基繼續(xù)培養(yǎng),。潤洗不能清除的可以換液清洗后等細胞密度70-80%左右消化處理細胞，消化完成后加完*培養(yǎng)基終止消化,，混勻細胞,，收集細胞懸液900-1000rpm(約150g)離心3min，棄上清,。再加5mL PBS重懸細胞,，再離心后，用完*培養(yǎng)基重懸接種到新的培養(yǎng)皿,。第二次PBS重懸是為了去除碎片,，如果平時碎片比較少，傳代時可以省略PBS重懸的步驟,；如果碎片很多,，建議PBS多洗幾次。

NO.3細胞具體消化時間是多久,？

每個實驗室用的胰酶活力及消化步驟,、試劑都是不一樣的，不能完*規(guī)定消化時間,，以實際消化效果和實驗經(jīng)驗為準,。 

產(chǎn)品推薦：

【SNL-073】 MDA-MB-231(人乳腺癌細胞)(STR鑒定正確)

【SNLM-073】MDA-MB-231細胞專用完*培養(yǎng)基