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　　一、準備材料
 

　　(1)儀器：凈化工作臺,、離心機,、恒溫水浴箱,、倒置相差顯微鏡、培養(yǎng)箱,、液氮冰箱
 

　　(2)玻璃器皿：吸管(彎頭,、直頭)、培養(yǎng)瓶,、玻璃瓶(250ml,、100ml)、廢液缸
 

　　(3)塑料器皿：吸頭,、槍頭,、膠塞、移液管(10ml),、15ml離心管,、凍存管(1～2ml)
 

　　(4)其他物品：微量加樣槍、紅血球計數(shù)板,、記號筆,、醫(yī)用橡皮膏、移液槍
 

　　(5)試劑：PBS,、小牛血清,、培養(yǎng)液、雙抗(青霉素,、鏈霉素),、胰蛋白酶(0.08%)
 

　　二、操作步驟

 

　　(1)原代細胞從液氮容器中取出凍存管,，直接浸入37℃溫水中,，并不時搖動令其盡快融化。
 

　　(2)從37℃水浴中取出凍存管,，75%酒精**后,，打開蓋子,，用吸管吸出細胞懸液,，加到離心管中。PriCells推薦接種培養(yǎng)瓶,，37℃培養(yǎng)箱靜置培養(yǎng),。
 

　　(3)離心，1000rpm,，5min,。PriCells推薦不離心。
 

　　(4)棄去上清液,，加入含10%小牛血清培養(yǎng)液重懸細胞,，計數(shù),，調整細胞密度，接種培養(yǎng)瓶,，37℃培養(yǎng)箱靜置培養(yǎng),。PriCells推薦小牛血清濃度依據原代細胞種類。
 

　　(5)次日更換一次1/2培養(yǎng)液,，繼續(xù)培養(yǎng),。
 

　　三、注意事項
 

　　(1)將凍存管從液氮容器中取出時,，要做好防護工作,，以免**。
 

　　(2)取出凍存管后立即放入水浴中,，使其盡快融化(在1-2分鐘內),。
 

　　(3)復蘇*好用新配制的培養(yǎng)液。