原代細(xì)胞復(fù)蘇實驗準(zhǔn)備:
(1)儀器：凈化工作臺、離心機,、恒溫水浴箱,、倒置相差顯微鏡、培養(yǎng)箱,、液氮冰箱
(2)玻璃器皿：吸管(彎頭,、直頭)、培養(yǎng)瓶、玻璃瓶(250ml,、100ml),、廢液缸
(3)塑料器皿：吸頭、槍頭,、膠塞,、移液管(10ml)、15ml離心管,、凍存管(1～2ml)
(4)其他物品：微量加樣槍,、紅血球計數(shù)板、記號筆,、醫(yī)用橡皮膏,、移液槍
(5)試劑：PBS、小牛血清,、培養(yǎng)液,、雙抗(青霉素、鏈霉素),、胰蛋白酶(0.08%)
原代細(xì)胞復(fù)蘇操作步驟:
(1)從液氮容器中取出凍存管,，直接浸入37℃溫水中，并不時搖動令其盡快融化,。
(2)從37℃水浴中取出凍存管,，75%酒精消毒后，打開蓋子,，用吸管吸出細(xì)胞懸液,，加到離心管中。PriCells推薦接種培養(yǎng)瓶,，37℃培養(yǎng)箱靜置培養(yǎng),。
(3)離心，1000rpm,，5min,。PriCells推薦不離心。
(4)棄去上清液,，加入含10%小牛血清培養(yǎng)液重懸細(xì)胞,，計數(shù)，調(diào)整細(xì)胞密度,，接種培養(yǎng)瓶,，37℃培養(yǎng)箱靜置培養(yǎng)。PriCells推薦小牛血清濃度依據(jù)原代細(xì)胞種類,。
(5)次日更換一次1/2培養(yǎng)液,，繼續(xù)培養(yǎng),。
注意事項:
(1)將凍存管從液氮容器中取出時，要做好防護(hù)工作,，以免凍傷,。
(2)取出凍存管后立即放入水浴中，使其盡快融化(在1-2分鐘內(nèi)),。
(3)復(fù)蘇好用新配制的培養(yǎng)液,。
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