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96T-大鼠I型膠原羥基端肽β降解產(chǎn)物（β-CTX）
  • 96T-大鼠I型膠原羥基端肽β降解產(chǎn)物（β-CTX）

貨物所在地：上海上海市

更新時間：2025-01-07 10:46:08

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大鼠I型膠原羥基端肽β降解產(chǎn)物（β-CTX）
本實驗采用雙抗夾心ELISA法,，所提供的ELISA是典型的夾心法酶聯(lián)免疫吸附測定試劑盒（ELISA）.預(yù)先包被的抗體抗大鼠IV型膠原酶（IV-C）GPER單克隆抗體，測相抗體為多克隆抗體,，經(jīng)生物素標(biāo)記（biotin）標(biāo)記,，樣品和生物標(biāo)記抗體先后加入酶標(biāo)孔反應(yīng)后。

大鼠I型膠原羥基端肽β降解產(chǎn)物(β-CTX)

【操作步驟】

  1. 從已平衡至室溫的密封袋中取出試驗所需板條,，未用的板條和干燥劑請放回鋁箔袋內(nèi)封  存于 2-8℃,。
  2. 預(yù)留空白孔（若使用雙波長讀板，空白孔可以不設(shè)）,。
  3. 分別將標(biāo)本或不同濃度人 Nesfatin-1 標(biāo)準(zhǔn)品（0pg/ml 孔加標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液）加入相應(yīng)孔中

(100μl/孔),，用封板膠紙封住反應(yīng)孔，37℃孵箱孵育 90 分鐘,。

  1. 提前 30 分鐘制備生物素化人 Nesfatin-1 抗體工作液,。
  2. 洗板 2 次。
  3. 加入生物素化人 Nesfatin-1 抗體工作液(100μl/孔),。用封板膠紙封住反應(yīng)孔,，37℃孵箱孵育 60 分鐘。
  4. 提前 30 分鐘制備酶結(jié)合物工作液,。室溫避光放置,。
  5. 洗板 3 次。
  6. 除空白孔外,，加入酶結(jié)合物工作液(100μl/孔),。用封板膠紙封住反應(yīng)孔，37℃孵箱,，避光孵育 30 分鐘,。
  7. 洗板 5 次。
  8. 加入 TMB 顯色工作液（包括空白孔）100μl/孔,，37℃孵箱,，避光孵育,，當(dāng)標(biāo)準(zhǔn)曲線高


 

濃度的顏色較深,，有明顯的顏色梯度的時候，即可終止,。試驗顯色反應(yīng)請勿超過 30 分鐘,。

  1. 加入終止液（包括空白孔）100μl/孔，混勻后即刻測量 OD（450nm）值(10 分鐘內(nèi))。

 

大鼠I型膠原羥基端肽β降解產(chǎn)物(β-CTX)【結(jié)果判斷】

  1. 每個標(biāo)準(zhǔn)品和標(biāo)本的 OD 值應(yīng)減去零孔的 OD 值,。（若不減零孔值,，標(biāo)準(zhǔn)曲線的零孔應(yīng)相交于 Y 軸）
  2. 手工繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線。以標(biāo)準(zhǔn)品濃度作橫坐標(biāo),，OD 值作縱坐標(biāo),，以平滑線連接各標(biāo)準(zhǔn)品的坐標(biāo)點。通過標(biāo)本的 OD 值可在標(biāo)準(zhǔn)曲線上查出其濃度,。推薦使用專業(yè)制作曲線軟件進行分析,，如 curve expert 1.3 進行結(jié)果計算。
  3. 若標(biāo)本 OD 值高于標(biāo)準(zhǔn)曲線上限,，應(yīng)適當(dāng)稀釋后重測,，計算濃度時應(yīng)乘以稀釋倍數(shù)。

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