驗收細胞注意事項 

1、收到人淋巴T細胞系Kit225,，請查看瓶子是否有破裂,，培養(yǎng)基是否漏出,，是否渾濁，如有請盡快聯(lián)系,。 

2,、收到人淋巴T細胞系Kit225，如包裝完好,，請在顯微鏡下觀察細胞,。,由于運輸過程中的問題，細胞培養(yǎng)瓶中的貼壁細胞有可能從瓶壁中脫落下來,，顯微鏡下觀察會出現(xiàn)細胞懸浮的情況,，出現(xiàn)此狀態(tài)時，請不要打開細胞培養(yǎng)瓶,，應(yīng)立即將培養(yǎng)瓶置于細胞培養(yǎng)箱里靜止 3-5 小時左右,，讓細胞先穩(wěn)定下，再于顯微鏡下觀察,，此時多數(shù)細胞會重新貼附于瓶壁,。如細胞仍不能貼壁，請用臺盼藍染色法鑒定細胞活力,，如臺盼藍染色證實細胞活力正常請按懸浮細胞的方法處理,。 

3、收到人淋巴T細胞系Kit225后,，請鏡下觀察細胞,，用恰當方式處理細胞。若懸浮的細胞較多,，請離心收集細胞,，接種到一個新的培養(yǎng)瓶中。棄掉原液,，使用新鮮配制的培養(yǎng)基,，使用進口胎牛血清。剛接到細胞,，若細胞不多時 血清濃度可以加到 15％去培養(yǎng),。若細胞迏到 80%左右 ，血清濃度還是在 10％,。 

4,、收到人淋巴T細胞系Kit225時如無異常情況 ，請在顯微鏡下觀察細胞密度,，如為貼壁細胞,，未超過80%匯合度時，將培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)基吸出,，留下 5-10ML 培養(yǎng)基繼續(xù)培養(yǎng)：超過 80%匯合度時,，請按細胞培養(yǎng)條件傳代培養(yǎng),。如為懸浮細胞，吸出培養(yǎng)液,，1000 轉(zhuǎn)/分鐘離心 3 分鐘,，吸出上清，管底細胞用新鮮培養(yǎng)基懸浮細胞后移回培養(yǎng)瓶,。 

5,、將培養(yǎng)瓶置于 37℃培養(yǎng)箱中培養(yǎng)，蓋子微微擰松,。吸出的培養(yǎng)基可以保存在滅菌過的瓶子里,，存放于 4℃冰箱，以備不時之需,。 

6,、24 小時后，人淋巴T細胞系Kit225形態(tài)已恢復(fù)并貼滿瓶壁,，即可傳代,。（貼壁細胞）將培養(yǎng)瓶里的培養(yǎng)基倒去，加 3-5ml（以能覆蓋細胞生長面為準）PBS 或 Hanks’液洗滌后棄去,。加 0.5-1ml 0.25%含 EDTA 的胰酶消化,，消化時間以具體細胞為準，一般 1-3 分鐘,，不超過 5 分鐘?？梢苑?/span>入37℃培養(yǎng)箱消化,。輕輕晃動瓶壁，見細胞脫落下來,，加入 3-5ml 培養(yǎng)基終止消化,。用移液管輕輕吹打瓶壁上的細胞，使之*脫落,，然后將溶液吸入離心管內(nèi)離心,，1000rpm/5min。棄上清,，視細胞數(shù)量決定分瓶數(shù),，一般一傳二，如細胞量多可一傳三,，有些細胞不易傳得過稀,，有些生長較快的細胞則可以多傳幾瓶，以具體細胞和經(jīng)驗為準,。（懸浮細胞）用移液管輕輕吹打瓶壁,，直接將溶液吸入離心管離心即可,。 

7、貼壁細胞 ,，懸浮細胞,。嚴格無菌操作。換液時,，換新的細胞培養(yǎng)瓶和換新鮮的培養(yǎng)液,，37℃，5%CO2 培養(yǎng),。

特別提醒： 原瓶中培養(yǎng)基不宜繼續(xù)使用,，請更換新鮮培養(yǎng)基培養(yǎng)。