驗收細胞注意事項 

1,、收到人角膜上皮細胞HCEC細胞,，請查看瓶子是否有破裂，培養(yǎng)基是否漏出,，是否渾濁,，如有請盡快聯(lián)系。 

2,、收到人角膜上皮細胞HCEC細胞,，如包裝完好，請在顯微鏡下觀察細胞。,由于運輸過程中的問題,，細胞培養(yǎng)瓶中的貼壁細胞有可能從瓶壁中脫落下來,，顯微鏡下觀察會出現(xiàn)細胞懸浮的情況，出現(xiàn)此狀態(tài)時,，請不要打開細胞培養(yǎng)瓶，應立即將培養(yǎng)瓶置于細胞培養(yǎng)箱里靜止 3-5 小時左右,，讓細胞先穩(wěn)定下,，再于顯微鏡下觀察，此時多數(shù)細胞會重新貼附于瓶壁,。如細胞仍不能貼壁,，請用臺盼藍染色法鑒定細胞活力，如臺盼藍染色證實細胞活力正常請按懸浮細胞的方法處理,。 

3,、收到人角膜上皮細胞HCEC細胞后，請鏡下觀察細胞,，用恰當方式處理細胞,。若懸浮的細胞較多，請離心收集細胞,，接種到一個新的培養(yǎng)瓶中,。棄掉原液，使用新鮮配制的培養(yǎng)基,，使用進口胎牛血清,。剛接到細胞，若細胞不多時 血清濃度可以加到 15％去培養(yǎng),。若細胞迏到 80%左右 ,，血清濃度還是在 10％。 

4,、收到人角膜上皮細胞HCEC時如無異常情況 ,，請在顯微鏡下觀察細胞密度，如為貼壁細胞,，未超過80%匯合度時,，將培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)基吸出，留下 5-10ML 培養(yǎng)基繼續(xù)培養(yǎng)：超過 80%匯合度時,，請按細胞培養(yǎng)條件傳代培養(yǎng),。如為懸浮細胞，吸出培養(yǎng)液,，1000 轉/分鐘離心 3 分鐘,，吸出上清，管底細胞用新鮮培養(yǎng)基懸浮細胞后移回培養(yǎng)瓶,。 

5,、將培養(yǎng)瓶置于 37℃培養(yǎng)箱中培養(yǎng),，蓋子微微擰松。吸出的培養(yǎng)基可以保存在滅菌過的瓶子里,，存放于 4℃冰箱,，以備不時之需。 

6,、24 小時后,，人角膜上皮細胞HCEC形態(tài)已恢復并貼滿瓶壁，即可傳代,。（貼壁細胞）將培養(yǎng)瓶里的培養(yǎng)基倒去,，加 3-5ml（以能覆蓋細胞生長面為準）PBS 或 Hanks’液洗滌后棄去。加 0.5-1ml 0.25%含 EDTA 的胰酶消化,，消化時間以具體細胞為準,，一般 1-3 分鐘，不超過 5 分鐘,?？梢苑?/span>入37℃培養(yǎng)箱消化。輕輕晃動瓶壁,，見細胞脫落下來,，加入 3-5ml 培養(yǎng)基終止消化。用移液管輕輕吹打瓶壁上的細胞,，使之*脫落,，然后將溶液吸入離心管內離心，1000rpm/5min,。棄上清,，視細胞數(shù)量決定分瓶數(shù)，一般一傳二,，如細胞量多可一傳三,，有些細胞不易傳得過稀，有些生長較快的細胞則可以多傳幾瓶,，以具體細胞和經(jīng)驗為準,。（懸浮細胞）用移液管輕輕吹打瓶壁，直接將溶液吸入離心管離心即可,。 

7,、貼壁細胞 ，懸浮細胞,。嚴格無菌操作,。換液時，換新的細胞培養(yǎng)瓶和換新鮮的培養(yǎng)液，37℃,，5%CO2 培養(yǎng),。

特別提醒： 原瓶中培養(yǎng)基不宜繼續(xù)使用，請更換新鮮培養(yǎng)基培養(yǎng),。