驗(yàn)收細(xì)胞注意事項(xiàng) 

1,、收到人骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞MSC 細(xì)胞,，請(qǐng)查看瓶子是否有破裂，培養(yǎng)基是否漏出,，是否渾濁,，如有請(qǐng)盡快聯(lián)系。 

2,、收到人骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞MSC 細(xì)胞,，如包裝完好，請(qǐng)?jiān)陲@微鏡下觀察細(xì)胞,。,由于運(yùn)輸過程中的問題,，細(xì)胞培養(yǎng)瓶中的貼壁細(xì)胞有可能從瓶壁中脫落下來，顯微鏡下觀察會(huì)出現(xiàn)細(xì)胞懸浮的情況,，出現(xiàn)此狀態(tài)時(shí),，請(qǐng)不要打開細(xì)胞培養(yǎng)瓶，應(yīng)立即將培養(yǎng)瓶置于細(xì)胞培養(yǎng)箱里靜止 3-5 小時(shí)左右,，讓細(xì)胞先穩(wěn)定下,，再于顯微鏡下觀察，此時(shí)多數(shù)細(xì)胞會(huì)重新貼附于瓶壁,。如細(xì)胞仍不能貼壁,，請(qǐng)用臺(tái)盼藍(lán)染色法鑒定細(xì)胞活力，如臺(tái)盼藍(lán)染色證實(shí)細(xì)胞活力正常請(qǐng)按懸浮細(xì)胞的方法處理,。 

3,、收到人骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞MSC 細(xì)胞后，請(qǐng)鏡下觀察細(xì)胞,，用恰當(dāng)方式處理細(xì)胞,。若懸浮的細(xì)胞較多，請(qǐng)離心收集細(xì)胞,，接種到一個(gè)新的培養(yǎng)瓶中,。棄掉原液，使用新鮮配制的培養(yǎng)基,，使用進(jìn)口胎牛血清,。剛接到細(xì)胞，若細(xì)胞不多時(shí) 血清濃度可以加到 15％去培養(yǎng),。若細(xì)胞迏到 80%左右 ,，血清濃度還是在 10％。 

4,、收到人骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞MSC 細(xì)胞時(shí)如無異常情況 ,，請(qǐng)?jiān)陲@微鏡下觀察細(xì)胞密度，如為貼壁細(xì)胞,，未超過80%匯合度時(shí),，將培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)基吸出,，留下 5-10ML 培養(yǎng)基繼續(xù)培養(yǎng)：超過 80%匯合度時(shí)，請(qǐng)按細(xì)胞培養(yǎng)條件傳代培養(yǎng),。如為懸浮細(xì)胞,，吸出培養(yǎng)液，1000 轉(zhuǎn)/分鐘離心 3 分鐘,，吸出上清,，管底細(xì)胞用新鮮培養(yǎng)基懸浮細(xì)胞后移回培養(yǎng)瓶。 

5,、將培養(yǎng)瓶置于 37℃培養(yǎng)箱中培養(yǎng),，蓋子微微擰松。吸出的培養(yǎng)基可以保存在滅菌過的瓶子里,，存放于 4℃冰箱,，以備不時(shí)之需。 

6,、24 小時(shí)后,，人骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞MSC 細(xì)胞形態(tài)已恢復(fù)并貼滿瓶壁，即可傳代,。（貼壁細(xì)胞）將培養(yǎng)瓶里的培養(yǎng)基倒去,，加 3-5ml（以能覆蓋細(xì)胞生長面為準(zhǔn)）PBS 或 Hanks’液洗滌后棄去。加 0.5-1ml 0.25%含 EDTA 的胰酶消化,，消化時(shí)間以具體細(xì)胞為準(zhǔn),，一般 1-3 分鐘，不超過 5 分鐘,?？梢苑?/span>入37℃培養(yǎng)箱消化。輕輕晃動(dòng)瓶壁,，見細(xì)胞脫落下來,，加入 3-5ml 培養(yǎng)基終止消化。用移液管輕輕吹打瓶壁上的細(xì)胞,，使之*脫落，然后將溶液吸入離心管內(nèi)離心,，1000rpm/5min,。棄上清，視細(xì)胞數(shù)量決定分瓶數(shù),，一般一傳二,，如細(xì)胞量多可一傳三，有些細(xì)胞不易傳得過稀,，有些生長較快的細(xì)胞則可以多傳幾瓶,，以具體細(xì)胞和經(jīng)驗(yàn)為準(zhǔn),。（懸浮細(xì)胞）用移液管輕輕吹打瓶壁，直接將溶液吸入離心管離心即可,。 

7,、貼壁細(xì)胞 ，懸浮細(xì)胞,。嚴(yán)格無菌操作,。換液時(shí)，換新的細(xì)胞培養(yǎng)瓶和換新鮮的培養(yǎng)液,，37℃,，5%CO2 培養(yǎng)。

特別提醒： 原瓶中培養(yǎng)基不宜繼續(xù)使用,，請(qǐng)更換新鮮培養(yǎng)基培養(yǎng),。