DH5α-λpir 化學感受態(tài)細胞

產品規(guī)格CAT#: BFNC86002-01(10×100ul)/BFNC86002-02(50×100ul)

DH5α λpir：                                              100μl/支

pUC19 (control vector,，10pg/μl):                   10μl

保存條件(保質期)：                            -80℃（6個月）

基因型

F- φ80 lac ZΔM15 Δ(lacZYA-arg F) LAMpir U169 endA1 recA1 hsdR17(r_k^-,m_k⁺) supE44λ- thi -1 gyrA96 relA1 phoA

產品說明

DH5α λpir菌株來源于DH5α,，在DH5α大腸桿菌基因組中引入LAMpir，即為DH5α λpir,，該菌株可以表達 PIR蛋白,，使得含有R6Kg ori復制子的質粒可以在其中正常復制,。 DH5α λpir菌株缺失核酸內切酶 (endA),，提高了質粒DNA的產量和質量,；重組酶缺陷型 (recA)減少插入片段的同源重組概率，保證了插入DNA 的穩(wěn)定性,；lacZΔM15的存在使DH5α可用于藍,、白斑篩選；但DH5α λpir菌株生長速度較慢,，在平板培養(yǎng)或液體搖菌時應延長生長時間,。

青旗生物生產的DH5α λpir感受態(tài)細胞經特殊工藝制作，pUC19質粒檢測轉化效率>1×10⁹ cfu/μg DNA,。

DH5α-λpir 化學感受態(tài)細胞

操作方法

1. DH5α λpir感受態(tài)細胞從-80℃拿出,，迅速插入冰中，5分鐘后待菌塊融化,，加入目的DNA（質?；蜻B接產物）并用手bo打EP管底混勻，冰中靜置25分鐘,。

2. 42℃水浴熱激45秒,，迅速放回冰上并靜置2分鐘，晃動會降低轉化效率,。

3. 向離心管中加入700 μl不含抗生素的無菌培養(yǎng)基 (LB),，混勻后37℃，200 rpm復蘇70分鐘,。

4. 5000 rpm離心1分鐘收集菌體,，留取100 μl左右上清輕輕吹打重懸菌塊并涂布到含相應抗生素的LB培養(yǎng)基上。

5. 將平板倒置放于37℃培養(yǎng)箱至少18小時,。

注意事項

1. 感受態(tài)細胞在冰中緩慢融化,。插入冰中8分鐘內加入目標DNA，不可在冰中放置時間過長,，長時間存放會降低轉化效率,。

2. DH5α λpir菌株生長緩慢,，在平板上培養(yǎng)或液體搖菌時應延長菌體生長時間（37℃,，18小時以上）。

3. 轉化高濃度的質?；蚋咝实倪B接產物可相應減少終用于涂板的菌量,。