樣本處理及要求:
1.血清:室溫血液自然凝固 10-20 分鐘,,離心 20 分鐘左右(2000-3000 轉(zhuǎn)/分),。仔細(xì)收 集上清,保存過程中如出現(xiàn)沉淀,,應(yīng)再次離心,。
2.血漿:應(yīng)根據(jù)標(biāo)本的要求選擇 EDTA 或檸檬酸鈉作為抗凝劑,混合 10-20 分鐘后,,離心20分鐘左右(2000-3000 轉(zhuǎn)/分),。仔細(xì)收集上清,保存過程中如有沉淀形成,,應(yīng)該再次離心,。
3.尿液:用無菌管收集,離心 20 分鐘左右(2000-3000 轉(zhuǎn)/分),。仔細(xì)收集上清,,保存過程中如有沉淀形成,應(yīng)再次離心,。胸腹水,、腦脊液參照實行。
4.細(xì)胞培養(yǎng)上清:檢測分泌性的成份時,,用無菌管收集,。離心 20 分鐘左右(2000-3000轉(zhuǎn)/分)。仔細(xì)收集上清,。檢測細(xì)胞內(nèi)的成份時,,用 PBS(PH7.2-7.4)稀釋細(xì)胞懸液,細(xì)胞濃度達(dá)到 100萬/ml 左右,。通過反復(fù)凍融,,以使細(xì)胞破壞并放出細(xì)胞內(nèi)成份。離心20分鐘左右(2000-3000 轉(zhuǎn)/分),。仔細(xì)收集上清,。保存過程中如有沉淀形成,應(yīng)再次離心,。
5.組織標(biāo)本:切割標(biāo)本后,,稱取重量。加入一定量的PBS,,PH7.4,。用液氮迅速冷凍保存?zhèn)溆谩?biāo)本融化后仍然保持2-8℃的溫度,。加入一定量的PBS(PH7.4),,用手工或勻漿器將標(biāo)本勻漿充分。離心20分鐘左右(2000-3000轉(zhuǎn)/分)。仔細(xì)收集上清,。分裝后一份待檢測,,其余冷凍備用。
6.標(biāo)本采集后盡早進行提取,,提取按相關(guān)文獻(xiàn)進行,,提取后應(yīng)盡快進行實驗。若不能馬上 進行試驗,,可將標(biāo)本放于-20℃保存,,但應(yīng)避免反復(fù)凍融.
7.不能檢測含 NaN3 的樣品,因 NaN3 抑制辣根過氧化物酶的(HRP)活性,。
產(chǎn)品名稱:人白細(xì)胞介素1β (IL-1β)ELISA試劑盒
操作步驟
1.標(biāo)準(zhǔn)品的加樣:設(shè)置標(biāo)準(zhǔn)品孔和樣本孔,,標(biāo)準(zhǔn)品孔各加不同濃度的標(biāo)準(zhǔn)品 50μL;,。
2.加樣:分別設(shè)空白孔(空白對照孔不加樣品及酶標(biāo)試劑,,其余各步操作相同)、待測樣品孔,。在酶標(biāo)包被板上待測樣品孔中先加樣品稀釋液 40μl,,然后再加待測樣品 10μl(樣品終稀釋度為 5 倍)。加樣將樣品加于酶標(biāo)板孔底部,,盡量不觸及孔壁,輕輕晃動混勻,。
3.加酶:每孔加入酶標(biāo)試劑 100μl,,空白孔除外。
4.溫育:用封板膜封板后置 37℃溫育 60 分鐘,。
5.配液:將 20 倍濃縮洗滌液用蒸餾水 20 倍稀釋后備用,。
6.洗滌:小心揭掉封板膜,棄去液體,,甩干,,每孔加滿洗滌液,靜置 30 秒后棄去,,如此重復(fù) 5 次,,拍干。
7.顯色:每孔先加入顯色劑A 50μl,,再加入顯色劑B 50μl,,輕輕震蕩混勻,37℃避光顯色15分鐘.
8.終止:每孔加終止液 50μl,,終止反應(yīng)(此時藍(lán)色立轉(zhuǎn)黃色),。
9.測定:以空白孔調(diào)零,450nm 波長依序測量各孔的吸光度(OD 值),。 測定應(yīng)在加終止液后 15 分鐘以內(nèi)進行,。
人白細(xì)胞介素1β (IL-1β)ELISA試劑盒
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