產品名稱：小鼠白介素6(IL-6)ELISA試劑盒
實驗原理：
本試劑盒應用雙抗體夾心法測定標本中小鼠白介素6(IL-6)水平,。用純化的小鼠白介素6(IL-6)捕獲抗體包被微孔板,，制成固相抗體,，往包被的微孔中依次加入小鼠白介素6(IL-6)，再與HRP標記的檢測抗體結合,，形成抗體-抗原-酶標抗體復合物,，經過*洗滌后加底物TMB顯色,。TMB 在 HRP 酶的催化下轉化成藍色，并在酸的作用下轉化成終的黃色,。顏色的深淺和樣品中的小鼠白介素6(IL-6)呈正相關。用酶標儀在 450nm 波長下測定吸光度（OD值）,，通過標準曲線計算樣品中小鼠白介素6(IL-6)含量,。
注：標準品濃度依次為：120、60,、30,、15、7.5,、0 pg/mL.
樣本處理及要求：
1.血清：室溫血液自然凝固 10-20 分鐘,，離心 20 分鐘左右（2000-3000 轉/分）。仔細收 集上清,，保存過程中如出現沉淀,，應再次離心。
2.血漿：應根據標本的要求選擇 EDTA 或檸檬酸鈉作為抗凝劑,，混合 10-20 分鐘后,，離心20分鐘左右（2000-3000 轉/分）。仔細收集上清,，保存過程中如有沉淀形成,，應該再次離心。
3.尿液：用無菌管收集,，離心 20 分鐘左右（2000-3000 轉/分）,。仔細收集上清，保存過程中如有沉淀形成,，應再次離心,。胸腹水、腦脊液參照實行,。
4.細胞培養(yǎng)上清：檢測分泌性的成份時,，用無菌管收集。離心 20 分鐘左右（2000-3000轉/分）,。仔細收集上清,。檢測細胞內的成份時，用 PBS（PH7.2-7.4）稀釋細胞懸液,，細胞濃度達到 100萬/ml 左右,。通過反復凍融，以使細胞破壞并放出細胞內成份,。離心20分鐘左右（2000-3000 轉/分）,。仔細收集上清,。保存過程中如有沉淀形成，應再次離心,。
5.組織標本：切割標本后,，稱取重量。加入一定量的PBS,，PH7.4,。用液氮迅速冷凍保存?zhèn)溆谩吮救诨笕匀槐３?-8℃的溫度,。加入一定量的PBS（PH7.4）,，用手工或勻漿器將標本勻漿充分。離心20分鐘左右（2000-3000轉/分）,。仔細收集上清,。分裝后一份待檢測，其余冷凍備用,。
6.標本采集后盡早進行提取,，提取按相關文獻進行，提取后應盡快進行實驗,。若不能馬上 進行試驗,，可將標本放于-20℃保存，但應避免反復凍融.
7.不能檢測含 NaN3 的樣品,，因 NaN3 抑制辣根過氧化物酶的（HRP）活性,。
操作步驟
1.標準品的加樣：設置標準品孔和樣本孔，標準品孔各加不同濃度的標準品 50μL,；,。
2.加樣：分別設空白孔（空白對照孔不加樣品及酶標試劑，其余各步操作相同）,、待測樣品孔,。在酶標包被板上待測樣品孔中先加樣品稀釋液 40μl，然后再加待測樣品 10μl（樣品終稀釋度為 5 倍）,。加樣將樣品加于酶標板孔底部,，盡量不觸及孔壁，輕輕晃動混勻,。
3.加酶：每孔加入酶標試劑 100μl,，空白孔除外。
4.溫育：用封板膜封板后置 37℃溫育 60 分鐘,。
5.配液：將 20 倍濃縮洗滌液用蒸餾水 20 倍稀釋后備用,。
6.洗滌：小心揭掉封板膜，棄去液體，甩干,，每孔加滿洗滌液,，靜置 30 秒后棄去，如此重復 5 次,，拍干,。
7.顯色：每孔先加入顯色劑A 50μl，再加入顯色劑B 50μl,，輕輕震蕩混勻,，37℃避光顯色15分鐘.
8.終止：每孔加終止液 50μl，終止反應（此時藍色立轉黃色）,。
9.測定：以空白孔調零，450nm 波長依序測量各孔的吸光度（OD 值）,。 測定應在加終止液后 15 分鐘以內進行,。
注意事項：
1．試劑盒從冷藏環(huán)境中取出應在室溫平衡 15-30 分鐘后方可使用，酶標包被板開封后如未用完,，板條應裝入密封袋中保存,。樣本在使用前也要在室溫平衡 60 分鐘。
2．濃洗滌液可能會有結晶析出,，稀釋時可在水浴中加溫助溶,，洗滌時不影響結果。
3．各步加樣均應使用加樣器,，并經常校對其準確性,，以避免試驗誤差。一次加樣時間盡量控制在 5 分鐘內,，如標本數量多,，推薦使用排槍加樣。
4．請每次測定的同時做標準曲線,，盡量做復孔,。如標本中待測物質含量過高（樣本 OD 值大于標準品孔第one孔的 OD 值），請先用樣品稀釋液稀釋一定倍數（n倍）后再測定,，計算時請后乘以總稀釋倍數（×n×5）,。
5．封板膜只限一次性使用，以避免交叉污染,。
6．底物請避光保存,。
7．嚴格按照說明書的操作進行，試驗結果判定必須以酶標儀讀數為準.
8．所有樣品,，洗滌液和各種廢棄物都應按傳染物處理,。
9．本試劑不同批號組分不得混用。
10.如與英文說明書有異，以英文說明書為準,。
計算：
以標準物的濃度為橫坐標,，OD 值為縱坐標，在坐標紙上繪出標準曲線,，根據樣品的OD值由標準曲線查出相應的濃度,；再乘以稀釋倍數；或用標準物的濃度與OD值計算出標準曲線的直線回歸方程式,，將樣品的OD值代入方程式,，計算出樣品濃度，再乘以稀釋倍數,，即為樣品的實際濃度,。
（此圖僅供參考）
試劑盒名稱：小鼠白介素6(IL-6)ELISA試劑盒
關鍵詞：IL-6,白介素6，白細胞介素6,，ELISA試劑盒
試劑盒性能：
1.樣品線性回歸與預期濃度相關系數 R 值為 0.95 以上,。
2.批內變異系數與批間變異系數應分別小于10%和15% 。
檢測范圍：
3.75 pg/mL - 120 pg/mL
靈敏度：
di檢測濃度小于 10 pg/mL
保存條件及有效期：
1．試劑盒保存：2-8℃,。
2．有效期：6個月
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