熒光細(xì)胞分析儀基于熒光標(biāo)記與檢測原理,,實(shí)現(xiàn)對(duì)細(xì)胞的精準(zhǔn)分析。其底層原理主要涉及熒光標(biāo)記,、激發(fā)與發(fā)射,、信號(hào)采集與分析等環(huán)節(jié)。
熒光標(biāo)記是關(guān)鍵步驟,,利用熒光蛋白或熒光素酶報(bào)告基因作為標(biāo)志物,,如綠色熒光蛋白(GFP)和紅色熒光蛋白(RFP),通過轉(zhuǎn)基因技術(shù)構(gòu)建到載體上,,對(duì)研究細(xì)胞進(jìn)行標(biāo)記,。這些標(biāo)志物與細(xì)胞內(nèi)的特定分子結(jié)合,從而實(shí)現(xiàn)對(duì)目標(biāo)分子的標(biāo)記,。
在檢測過程中,,熒光細(xì)胞分析儀使用特定波長的光作為激發(fā)光源,通常為紫外光或可見光,。當(dāng)激發(fā)光照射到被標(biāo)記的細(xì)胞上時(shí),,熒光物質(zhì)吸收光能并躍遷到高能級(jí)狀態(tài)。由于高能級(jí)狀態(tài)不穩(wěn)定,,熒光物質(zhì)會(huì)迅速返回低能級(jí)狀態(tài),,并在此過程中發(fā)射出特定波長的熒光。
發(fā)射出的熒光信號(hào)被熒光細(xì)胞分析儀的光學(xué)系統(tǒng)收集并傳輸至檢測器。檢測器將熒光信號(hào)轉(zhuǎn)換為電信號(hào),,再經(jīng)過數(shù)據(jù)處理系統(tǒng)的處理,,如放大、濾波,、數(shù)字化等操作,,最終得到細(xì)胞的定性或定量分析結(jié)果。
以CountstarRigel全自動(dòng)熒光細(xì)胞分析儀為例,,它基于圖像法檢測,,配合多熒光通道,通過采集圖像中的細(xì)胞信息,,進(jìn)行定量分析,。它既能提供細(xì)胞群的統(tǒng)計(jì)數(shù)據(jù),又可以獲得單個(gè)細(xì)胞的圖像,,從而提供細(xì)胞形態(tài)學(xué)信息,。圖像采集系統(tǒng)同時(shí)產(chǎn)生明場以及四張熒光圖像,讓實(shí)驗(yàn)結(jié)果更為直觀,。
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