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游離DNA提取試劑盒的操作手段
近幾年來，隨著基因診斷技術的發(fā)展，游離DNA的應用價值越來越大,，如優(yōu)生篩查、腫瘤早期診斷,、遺傳病檢測和病原體感染基因檢測等,。游離DNA是存在于血液(血漿或血清)、腦脊液等體液中的細胞外DNA,，也叫循環(huán)DNA,。其主要是由單鏈或雙鏈DNA以及單鏈與雙鏈DNA的混合物組成，以DNA和蛋白質(zhì)復合物或游離DNA兩種形式存在,。分析血液中腫瘤特異性的胞外DNA片段可對普通血液樣品進行特異性地腫瘤類型檢測,。游離DNA提取試劑盒的操作手段你知道嗎？
1. 請自行準備：無水乙醇,、1.5mL離心管,。
2. 取出洗滌液，按以下操作：
a) 洗滌液A：21mL加入9mL無水乙醇,；42mL加入18mL無水乙醇,。 b) 洗滌液B：9mL加入21mL無水乙醇；18mL加入42mL無水乙醇,。 c) 配制好的洗滌液如出現(xiàn)沉淀,，可在37℃溶解，搖勻后使用,。
3. 取1.5mL離心管,，加入200μL樣本，4μLDNA Carrier混合均勻，加入300μL 裂解液及20μL 消化液,，振蕩混勻,，56℃水浴10 分鐘。
4. 加入1000μL無水乙醇,，輕輕顛倒混勻,，如有半透明懸浮物，不影響DNA的提取與后續(xù)實驗,。
5. 將吸附柱放入收集管內(nèi),，將760μL上述溶液轉(zhuǎn)入吸附柱內(nèi)，靜置2 分鐘,，12,000 rpm 4℃離心1 分鐘,，棄收集管內(nèi)廢液；
6. 將吸附柱放回收集管內(nèi),，將剩余760μL溶液轉(zhuǎn)移至吸附柱內(nèi),，重復步驟5。
7. 將吸附柱放回收集管內(nèi),，加500μL 洗滌液A至吸附柱內(nèi),，12,000 rpm 4℃離心1 分鐘，棄收集管內(nèi)廢液,。
8. 將吸附柱放回收集管內(nèi),，加500μL 洗滌液B至吸附柱內(nèi)，12,000 rpm 4℃離心1 分鐘,，棄收集管內(nèi)廢液,。
9. 將吸附柱放回收集管內(nèi)，12,000 rpm 4℃離心2 分鐘,，離去殘留的洗滌液,。
10. 取出吸附柱，放入新的1.5 mL 離心管內(nèi),，加入30-50 μL 洗脫液,，靜置3 分鐘，12,000 rpm 4℃ 離心2 分鐘,，收集DNA溶液,。提取的DNA即可用于下一步實驗或-20℃保存。