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分享一份專業(yè)人員總結(jié)的全自動(dòng)PCR儀的試驗(yàn)操作注意事項(xiàng)
簡(jiǎn)單的說，全自動(dòng)PCR儀就是利用DNA聚合酶對(duì)特定基因做體外或試管內(nèi)InVitro的大量合成,，基本上它是利用DNA聚合酶進(jìn)行專一性的連鎖復(fù)制。
目前，常用的技術(shù)，可以將一段基因復(fù)制為原來的一百億至一千億倍,。根據(jù)DNA擴(kuò)增的目的和檢測(cè)的標(biāo)準(zhǔn)，可以將PCR儀分為普通PCR儀,，梯度PCR儀，原位PCR儀,，實(shí)時(shí)熒光定量PCR儀四類,。
全自動(dòng)PCR儀實(shí)驗(yàn)操作注意事項(xiàng)：
盡管擴(kuò)增序列的殘留污染大部分是假陽性反應(yīng)的原因，樣品間的交叉污染也是原因之一,。因此,，不僅要在進(jìn)行擴(kuò)增反應(yīng)是謹(jǐn)慎認(rèn)真，在樣品的收集,、抽提和擴(kuò)增的所有環(huán)節(jié)都應(yīng)該注意：
1.戴一次性手套,，若不小心濺上反應(yīng)液，立即更換手套,；
2.使用一次性吸頭,，嚴(yán)禁與PCR產(chǎn)物分析室的吸頭混用，吸頭不要長(zhǎng)時(shí)間暴露于空氣中,，避免氣溶膠的污染,；
3.避免反應(yīng)液飛濺，打開反應(yīng)管時(shí)為避免此種情況,，開蓋前稍離心收集液體于管底,。若不小心濺到手套或桌面上，應(yīng)立刻更換手套并用稀酸擦拭桌面；
4.操作多份樣品時(shí),，制備反應(yīng)混合液,，先將dNTP、緩沖液,、引物和酶混合好,，然后分裝，這樣即可以減少操作,，避免污染,，又可以增加反應(yīng)的精確度；
5.最后加入反應(yīng)模板,，加入后蓋緊反應(yīng)管,；
6.操作時(shí)設(shè)立陰陽性對(duì)照和空白對(duì)照，即可驗(yàn)證PCR反應(yīng)的可靠性,，又可以協(xié)助判斷擴(kuò)增系統(tǒng)的可信性,；
7.盡可能用可替換或可高壓處理的加樣器，由于加樣器最容易受產(chǎn)物氣溶膠或標(biāo)本DNA的污染,，最好使用可替換或高壓處理的加樣器,。
如沒有這種特殊的加樣器，至少PCR操作過程中加樣器應(yīng)該專用,，不能交叉使用,，尤其是PCR產(chǎn)物分析所用加樣器不能拿到其它兩個(gè)區(qū)；
8.重復(fù)實(shí)驗(yàn),，驗(yàn)證結(jié)果,，慎下結(jié)論。