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谷丙轉(zhuǎn)氨酶（GPT）活性檢測試劑盒（微量法）

注意：正式測定前務(wù)必取 2-3 個(gè)預(yù)期差異較大的樣本做預(yù)測定,。

產(chǎn)品貨號(hào)：BA1112

產(chǎn)品規(guī)格：100管/48樣

產(chǎn)品簡介：

GPT（EC 2.6.1.2）廣泛存在于動(dòng)物,、植物,、微生物和培養(yǎng)細(xì)胞中，催化氨基酸和酮酸轉(zhuǎn)氨基反應(yīng),，在氨基酸代謝中具有重要作用,。此外，哺乳動(dòng)物肝細(xì)胞GPT活性很高,，當(dāng)肝細(xì)胞壞死,，GPT釋放到血液中，血清GPT活性顯著增高,。因此,，GPT被世界衛(wèi)生組織推薦為肝功能損害最敏感的檢測指標(biāo)。

GPT催化丙氨酸和α-酮戊二酸發(fā)生轉(zhuǎn)氨基反應(yīng),，生成丙酮酸和谷氨酸,；加入2,4-er硝基苯肼溶液，不僅終止上述反應(yīng),，而且與酮酸中的羰基加成,，生成丙酮酸苯腙；苯腙在堿性條件下呈紅棕色,，可以在505nm讀取吸光值

并計(jì)算酶活力,。

產(chǎn)品內(nèi)容：

提取液：液體60mL×1瓶，4℃保存,。

試劑一：液體4mL×1瓶,，4℃保存；

試劑二：液體3.5 mL×1瓶,，4℃保存,；

試劑三：液體30 mL×1瓶，4℃保存,；

標(biāo)準(zhǔn)品：液體1mL×1支,，20µmol/mL丙酮酸鈉標(biāo)準(zhǔn)品，4℃保存,。

需自備的儀器和用品：

可見分光光度計(jì)/酶標(biāo)儀,、水浴鍋、臺(tái)式離心機(jī)、可調(diào)式移液器,、微量玻璃比色皿/96孔板,、研缽、冰和蒸水,。

操作步驟：

一,、樣品測定的準(zhǔn)備

1、 細(xì)胞或細(xì)菌的制備 ：

先收集細(xì)胞或細(xì)菌樣品到離心管內(nèi),，棄上清,，按照每500萬細(xì)胞或細(xì)菌加入1mL提取液，超聲波破碎細(xì)胞或細(xì)菌（功率20％,，超聲3s,，間隔10s，重復(fù)30次）,。3500g,，4℃離心10min，取上清,，置冰上待測,。

2、組織：稱取約0.1g組織,，加入1mL提取液進(jìn)冰浴行勻漿,。3500g 4℃離心10min，取上清,，置冰上待測,。

3、血清（漿）樣品：直接檢測,。

二,、測定步驟

1、 分光光度計(jì)或酶標(biāo)儀預(yù)熱30min以上,，調(diào)節(jié)波長至505nm,，蒸餾水調(diào)零。

2,、 標(biāo)準(zhǔn)曲線的測定

首先將標(biāo)準(zhǔn)品稀釋至2µmol/mL,，按下表混合標(biāo)準(zhǔn)品和試劑一得到濃度梯度標(biāo)準(zhǔn)管：

3．在EP管或在96孔板中加入下列試劑

注:0µmol/mL標(biāo)準(zhǔn)管為空白管,。

三,、計(jì)算公式：

1、標(biāo)準(zhǔn)曲線的繪制：

以各標(biāo)準(zhǔn)溶液濃度為x軸,，以?A（A標(biāo)準(zhǔn)管-A空白管）為y軸做標(biāo)準(zhǔn)曲線,，得到方程y=kx+b。將（A測定管-A對(duì)照管）帶入方程求x值,。

2,、GPT活性計(jì)算：

（1）按樣本鮮重計(jì)算：

單位定義：每小時(shí)每g樣品催化產(chǎn)生1µmol丙酮酸的量為一個(gè)GPT活力單位。

GPT（U/g鮮重）=x×（V樣本+V試劑一）÷（W×V樣本÷V樣總）÷T=12x÷W,。

（2）按樣本蛋白濃度計(jì)算：

單位定義：每小時(shí)每mg組織蛋白催化產(chǎn)生1µmol丙酮酸的量為一個(gè)GPT活力單位,。

GPT（U/mg prot）=x×（V樣本+V試劑一）÷（Cpr×V樣本）÷T=12x÷Cpr。

（3）按血清（漿）體積計(jì)算：

單位定義：每小時(shí)每mL血清（漿）樣品催化產(chǎn)生1µmol丙酮酸的量為一個(gè)GPT活力單位,。

GPT（U/mL）=x×（V樣本+V試劑一）÷V樣本÷T=12x,。

（4）按細(xì)胞或細(xì)菌數(shù)量計(jì)算：

單位定義：每小時(shí)每10⁴個(gè)細(xì)胞或細(xì)菌催化產(chǎn)生1µmol丙酮酸的量為一個(gè)GPT活力單位,。

GPT（U/10⁴ cell）=x×（V樣本+V試劑一）÷（500×V樣本÷V樣總）÷T=0.024x,。

V樣本：樣本體積，0.005mL,；V試劑一：試劑一體積,，0.025mL；V樣總：提取液體積,，1mL,；W：樣本鮮重，g,；Cpr：樣本蛋白質(zhì)濃度,，mg/mL；T：反應(yīng)時(shí)間,，0.5h,；500：細(xì)胞或細(xì)菌總數(shù)，萬,。