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超氧化物歧化酶（SOD）活性檢測(cè)試劑盒（微量法）

注意：正式測(cè)定前務(wù)必取 2-3 個(gè)預(yù)期差異較大的樣本做預(yù)測(cè)定,。

產(chǎn)品貨號(hào)：BA1068

產(chǎn)品規(guī)格：100管/48樣

產(chǎn)品簡(jiǎn)介：

SOD（EC 1.15.1.1）是一種廣泛存在于生物體內(nèi)的金屬酶，是重要的氧自由基清除劑,，能催化超氧化物陰離子發(fā)生岐化作用,，生成H₂O₂和O₂。SOD不僅是超氧化物陰離子清除酶,，也是H₂O₂主要生成酶,，在生物抗氧化系統(tǒng)中具有重要作用。

通過(guò)huang嘌呤及huang嘌呤氧化酶反應(yīng)系統(tǒng)產(chǎn)生超氧陰離子(O2^-),，O2^-可還原氮藍(lán)四唑生成藍(lán)色甲臜,，后者在 560nm處有吸收；SOD可清除O2^-,，從而抑制了甲臜的形成,；反應(yīng)液藍(lán)色越深，說(shuō)明SOD活性愈低,，反之活性越高,。

產(chǎn)品內(nèi)容：

提取液：液體100mL×1瓶，4℃保存。

試劑一：液體5mL×1瓶,，4℃保存,。

試劑二：液體100μL×1支，4℃保存,；使用前先離心再吹打混勻,。

試劑三：液體4mL×1瓶，4℃保存,。

試劑四：粉劑×1支,，4℃保存。（由于試劑量極少,，容易產(chǎn)生誤差,，現(xiàn)規(guī)格為0.0003g/支，使用時(shí)稱取0.00003g即可,。）

試劑五：液體2mL×1瓶,，4℃保存；臨用前將試劑四加入試劑五中,，并震蕩溶解,。

需自備的儀器和用品：

可見(jiàn)分光光度計(jì)/酶標(biāo)儀、臺(tái)式離心機(jī),、可調(diào)式移液器,、微量玻璃比色皿/96孔板、研缽,、冰和蒸餾水,。

操作步驟：

一、樣品的前處理：

(1) 細(xì)菌,、細(xì)胞或組織樣品的制備：

細(xì)胞,、細(xì)菌樣本：先收集細(xì)菌或細(xì)胞到離心管內(nèi)，離心后棄上清,，按照每500萬(wàn)細(xì)菌或細(xì)胞加入1mL提取液,，超聲波破碎（功率20%或200w，超聲3s,，間隔10s,，重復(fù)30次）。8000g 4℃離心10分鐘,，取上清,，置冰上待測(cè),。

組織樣本：稱取約0.1g組織,，加入1mL提取液進(jìn)行冰浴勻漿； 8000g 4℃離心10分鐘，取上清,，置冰上待測(cè),。

(2) 血清(漿)樣品：直接檢測(cè)。

二,、測(cè)定步驟：

1,、分光光度計(jì)/酶標(biāo)儀預(yù)熱30min以上，調(diào)節(jié)波長(zhǎng)至560nm,，蒸餾水調(diào)零,。

2、測(cè)定前將試劑一,、三和五37℃（哺乳動(dòng)物）或25℃（其它物種）水浴5min以上,。

3、樣本測(cè)定（按順序加入下列試劑）

充分混勻,，37℃水浴30min后,，560nm處測(cè)定各管吸光值A。計(jì)算ΔA測(cè)定=A測(cè)定-A對(duì)照,，ΔA空白=A空1-A空2,。如底部有沉淀，混勻后再行測(cè)定,。

注意：

1,、樣本和試劑二使用時(shí)在冰上放置。

2,、樣本較多時(shí),，可按表格配置工作液（包含試劑一、二,、三）,，試劑五必須最后加入。

3,、空白管1和空白管2各只需做1~2管,；每個(gè)樣本有一個(gè)對(duì)照管。

4,、反應(yīng)完成后,，可能有沉淀生成，混勻后測(cè)定即可,。

三,、SOD活性計(jì)算：

1、抑制百分率的計(jì)算

抑制百分率＝(ΔA空白-ΔA測(cè)定) ÷ΔA空白× 100%

盡量使樣品的抑制百分率在30-70%范圍內(nèi),，越靠近50%越準(zhǔn)確,。如果計(jì)算出來(lái)的抑制百分率小于30%或大于70%，則通常需要調(diào)整加樣量后重新測(cè)定。如果測(cè)定出來(lái)的抑制百分率偏高,，則需適當(dāng)稀釋樣品,；如果測(cè)定出來(lái)的抑制百分率偏低，則需重新準(zhǔn)備濃度比較高的待測(cè)樣品,。

2,、SOD酶活性單位：在上述huang嘌呤氧化酶藕聯(lián)反應(yīng)體系中抑制百分率為50%時(shí)，反應(yīng)體系中的SOD酶活力定義為一個(gè)酶活力單位,。

3,、SOD酶活性計(jì)算：

（1）血清（漿）SOD活性(U/mL)=[抑制百分率÷( 1-抑制百分率)×V反總]÷V樣×F

=11.11×抑制百分率÷( 1-抑制百分率)×F

（2）組織、細(xì)菌或培養(yǎng)細(xì)胞SOD活力計(jì)算：

A：按樣本蛋白濃度計(jì)算

SOD活性 (U/mg prot)=[抑制百分率÷（1-抑制百分率）×V反總]÷（V樣×Cpr）×F

=11.11×抑制百分率÷( 1-抑制百分率) ÷Cpr×F

B：按樣本鮮重計(jì)算

SOD活性 (U/g 鮮重)=[抑制百分率÷(1 -抑制百分率)×V反總]÷(W×V樣÷V樣總)×F

=11.11×抑制百分率÷( 1-抑制百分率) ÷W×F

C：按細(xì)菌或細(xì)胞個(gè)數(shù)計(jì)算

SOD =活力 (U/10⁴ cell)= [抑制百分率÷(1-抑制百分率)×V反總]÷(500×V樣÷V樣總)×F

=0.022×抑制百分率÷( 1-抑制百分率)×F

V反總：反應(yīng)體系總體積,，0.2mL,；V樣：加入反應(yīng)體系中樣本的體積，0.018mL,；V樣總：加入提取液體積,，1mL；Cpr：樣本蛋白質(zhì)濃度,，mg/mL,；W：樣品質(zhì)量，g,；500：細(xì)胞或細(xì)菌總數(shù),，500萬(wàn)，F：樣本稀釋倍數(shù),。