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多酚氧化酶（PPO）檢測試劑盒（鄰苯二酚微板法）

產(chǎn)品貨號(hào)：BA1542

產(chǎn)品規(guī)格：120T

產(chǎn)品簡介：

多酚氧化酶(polyphenol oxidase，PPO)是自然界中分布極廣的一種金屬蛋白酶,，普遍存在于植物,、真菌、昆蟲的質(zhì)體中,，甚至在土壤中腐爛的植物殘?jiān)隙伎梢詸z測到多酚氧化酶的活性,，多酚氧化酶是一種蛋白體，在茶樹生命活動(dòng)和茶葉加工過程中參與一系列由酶促活動(dòng)而引起的化學(xué)變化,，故又被稱為生物催化劑,。該酶屬于細(xì)胞木質(zhì)素合成途徑中間的關(guān)鍵酶，研究該酶可以探討多種生物細(xì)胞發(fā)育過程中木質(zhì)素沉積的代謝機(jī)理,，為減少水果石細(xì)胞含量提高其品質(zhì)提供依據(jù),。

尚寶生物多酚氧化酶(PPO)檢測試劑盒(鄰苯二酚比色法)檢測原理是以鄰苯二酚作為底物,，在酶促反應(yīng)的最適條件下采用每隔一定時(shí)間測定產(chǎn)物生成量的方法，于酶標(biāo)儀420nm處檢測吸光度,，以吸光度變化所需酶量進(jìn)行計(jì)算,。該試劑盒主要用于植物組織的裂解液或勻漿液、血清等樣品中內(nèi)源性的多酚氧化酶活性,，尤其適用于檢測水果中多酚氧化酶活性,。該試劑盒僅用于科研領(lǐng)域，不宜用于臨床診斷或其他用途,。

產(chǎn)品組成：

自備材料：

1.        蒸餾水

2.        研缽或勻漿器

3.        離心管或試管

4.        低溫離心機(jī)

5.        酶標(biāo)板

6.        酶標(biāo)儀

操作步驟：

1.        準(zhǔn)備樣品：

①植物樣品：取2g植物組織或水果中層果肉加入4ml預(yù)冷的PPO Lysis buffer 研磨或勻漿,，10000g,，4℃離心 15-20min，留取上清液,，-20℃凍存,，用于多酚氧化酶的檢測。

②血漿,、血清和尿液樣品：血漿,、血清按照常規(guī)方法制備后可以直接用于本試劑盒的測定，-20℃凍存,，用于多酚氧化酶的檢測,。

③細(xì)胞或組織樣品：取恰當(dāng)細(xì)胞或組織裂解液，如有必要用PPO Lysis buffer進(jìn)行適當(dāng)勻漿,，10000g,，4℃離心15-20min，取上清液,，-20℃凍存，用于多酚氧化酶的檢測,。

④高活性樣品：如果樣品中含有較高活性的多酚氧化酶,，可以使用PPO Lysis buffer稀釋進(jìn)行恰當(dāng)?shù)南♂尅?/span>

2.        PPO加樣：按照下表設(shè)置對照孔、測定孔,，注意：對照孔,、測定孔中為同一待測樣品，但對照孔中為提前加熱煮沸5min的樣品,。溶液應(yīng)按照順序依次加入,，并注意避免產(chǎn)生氣泡。如果樣品中的PPO活性過高,，可以減少樣品用量或適當(dāng)稀釋后再進(jìn)行測定,，樣品的檢測最好能設(shè)置2平行孔,，求平均值。

3.        PPO 檢測：立即以酶標(biāo)儀,，以對照孔為對照,，測定420nm處對照孔的吸光度(A測定0 )；1min后立即測定 420nm 處測定孔的吸光度(A測定1),。

計(jì)算：

PPO活性單位的定義：在該實(shí)驗(yàn)條件下,，每1min吸光度變化0.01所需酶量為一個(gè)活性單位。

組織樣本PPO(U)={(A_測定1 -A_測定0 )×V _T }/(W×V _S ×0.01×t)

式中：A_測定 1 =反應(yīng)1min后測定孔的吸光度

A_測定 0 =加入PPO Assay buffer立即測定的測定孔吸光度

W=組織樣本的重量(g)

V_T =提取酶液的總體積(ml)

V_S =測定時(shí)所用酶液體積(ml)

液體樣本PPO(U)=(A_測定1 -A_測定0 )/(0.01×t)

式中：A_測定1 =反應(yīng)1min后測定孔的吸光度

A_測定0 =加入PPO Assay buffer立即測定的測定孔吸光度

t=反應(yīng)時(shí)間

注意事項(xiàng)：

1.        待測樣品中不能含有酶抑制劑,，同時(shí)需避免反復(fù)凍融,。

2.        PPO酶液提取時(shí)，注意低溫操作,，防止酶活性,。4℃保存2-3天，亦可-20℃保存,。

3.        以煮沸的酶液為對照時(shí),，酶要充分失活。

4.        如果沒有酶標(biāo)儀,，也可以使用普通的分光光度計(jì)測定,；每次檢測指標(biāo)不宜過多，否則操作時(shí)間不一,，有可能導(dǎo)致樣本間的差異,。

有效期：6個(gè)月有效。