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丙二醛(MDA)含量檢測試劑盒（微量法）

正式測定前務(wù)必取2-3個預(yù)期差異較大的樣本做預(yù)測定,。

產(chǎn)品貨號：BA1066

產(chǎn)品規(guī)格：100管/96樣

產(chǎn)品內(nèi)容：

提取液：液體100mL×1瓶，4℃保存,；

試劑一：液體30mL×1瓶,，4℃保存；

試劑二：粉劑×2瓶,，4℃保存,；

MDA檢測工作液的配制：用時在每瓶試劑二中加入15mL試劑一，溶解混勻,，4℃保存待用,。

試劑三：液體10mL×1瓶，4℃保存；

注意事項(xiàng)：MDA檢測工作液較難溶解,，可以70℃加熱,，并劇烈振蕩以促進(jìn)溶解?；蛘咄ㄟ^超聲處理以促進(jìn)溶解,。

產(chǎn)品說明：

氧自由基作用于脂質(zhì)的不飽和脂肪酸，生成過氧化脂質(zhì),；后者逐漸分解為一系列復(fù)雜的化合物,，其中包括丙二醛 MDA。通過檢測 MDA 的水平即可檢測脂質(zhì)氧化的水平,。

丙er醛（MDA）在酸性和高溫條件下,，可以與硫代ba比妥酸(thiobarbituric acid，TBA)縮合,，生成棕紅色的san甲川（3,5,5-san甲基惡唑-2，4-er酮）,，其最大吸收波長在532nm,。進(jìn)行比色后可估測樣品中過氧化脂質(zhì)的含量。但是測定植物組織中MDA時受多種物質(zhì)的干擾,，其中最主要的是可溶性糖,，糖與TBA顯色反應(yīng)產(chǎn)物的最大吸收波長在450nm，但532nm處也有吸收,。所以同時測定600nm,、532nm、450nm下的吸光度,，利用532nm與450nm,、600nm下的吸光度的差值計算MDA的含量。

由于植物中受蔗糖干擾較大,，動物中受葡萄糖干擾較大,，所以本試劑盒有針對蔗糖和葡萄糖的兩個公式。若所測樣品為油脂類物質(zhì),，則兩個公式均可,。

需自備的儀器和用品：

可見分光光度計/酶標(biāo)儀、水浴鍋,、臺式離心機(jī),、可調(diào)式移液器、微量玻璃比色皿/96孔板,、研缽,、冰和蒸餾水。

操作步驟：

一,、MDA提?。?/span>

1,、細(xì)菌或細(xì)胞樣品的制備：收集細(xì)菌或細(xì)胞到離心管內(nèi)，離心后棄上清,；按照每400萬細(xì)菌或細(xì)胞加入1mL提取液,，超聲波破碎細(xì)菌或細(xì)胞（功率20％，超聲3s,，間隔10s,，重復(fù)30次）；8000g 4℃離心10min,，取上清,，置冰上待測。

2. 組織樣品的制備：稱取約0.1g組織,，加入1mL提取液進(jìn)行冰浴勻漿,；8000g 4℃離心10min，取上清,，置冰上待測,。

二、測定操作：

1,、可見分光光度計/酶標(biāo)儀預(yù)熱30min以上,，蒸餾水調(diào)零。

2,、按下表步驟加樣：

混合液在100℃水浴中保溫30min后（蓋緊,，防止水分散失），置于冰浴中冷卻,，10000g,，常溫，離心10min,。吸取200uL上清液于微量玻璃比色皿或96孔板中,，測定各樣品在450nm、532nm和600nm處的吸光度,。

三,、MDA含量計算：

a. 按96孔板計算

1、細(xì)菌,、細(xì)胞或動物組織中MDA含量計算

（1）按照蛋白濃度計算

MDA含量（nmol/ mg prot）=（12.9×（A₅₃₂-A₆₀₀）-2.58×A₄₅₀）×V總÷（Cpr×V樣本）

=5×（12.9×（A₅₃₂-A₆₀₀）-2.58×A₄₅₀）÷Cpr

（2）按照樣品質(zhì)量計算

MDA 含量（nmol/ g 鮮重）=（12.9×（A₅₃₂-A₆₀₀）-2.58×A₄₅₀）×V總÷（W×V樣本÷V提?。?/span>

=5×（12.9×（A₅₃₂ -A₆₀₀）-2.58×A₄₅₀）÷W

(3) 按照細(xì)菌或細(xì)胞密度計算：

MDA 含量（nmol/10⁴ cell）=（12.9×（A₅₃₂-A₆₀₀）-2.58×A₄₅₀）×V總÷（400÷V提取×V樣本）

=0.125×（12.9×（A₅₃₂-A₆₀₀）-2.58×A₄₅₀）

V總：反應(yīng)體系總體積，0.5mL,；V樣品：加入樣品體積,，0.1 mL；Cpr：樣本蛋白質(zhì)濃度，mg/mL,。 W：樣品質(zhì)量,，g；400：細(xì)胞或細(xì)菌總數(shù),，400萬,；V提取：提取液體積,，1mL,。

2、植物組織中MDA含量計算

（1）按照樣品質(zhì)量計算

MDA含量（nmol/ g鮮重）=（12.9×（A₅₃₂-A₆₀₀）-1.12×A₄₅₀）×V總÷（W×V樣本÷V提?。?/span>

=5×（12.9×（A₅₃₂-A₆₀₀）-1.12×A₄₅₀）÷W

（2）按照蛋白濃度計算

MDA含量（nmol/ mg prot）=（12.9×（A₅₃₂-A₆₀₀）-1.12×A₄₅₀）×V總÷（Cpr×V樣本）

=5×（12.9×（A₅₃₂-A₆₀₀）-1.12×A₄₅₀）÷Cpr

V總：反應(yīng)體系總體積,，0.5mL；V樣品：加入樣品體積,，0.1 mL,；Cpr：樣本蛋白質(zhì)濃度，mg/mL,。W：樣品質(zhì)量,，g；V提?。禾崛∫后w積,，1mL,。

b. 按微量比色皿計算

1,、細(xì)菌、細(xì)胞或動物組織中MDA含量計算

（1）按照蛋白濃度計算

MDA含量（nmol/ mg prot）=（6.45 ×（A₅₃₂-A₆₀₀）-1.29×A₄₅₀）×V總÷（Cpr×V樣本）

=5×（6.45 ×（A₅₃₂-A₆₀₀）-1.29×A₄₅₀）÷Cpr

（2）按照樣品質(zhì)量計算

MDA含量（nmol/ g鮮重）=（6.45 ×（A₅₃₂-A₆₀₀）-1.29×A₄₅₀）×V總÷（W×V樣本÷V提?。?/span>

=5×（6.45 ×（A₅₃₂-A₆₀₀）-1.29×A₄₅₀）÷W

(3) 按照細(xì)菌或細(xì)胞密度計算：

MDA 含量（nmol/10⁴ cell）=（6.45 ×（A₅₃₂-A₆₀₀）-1.29×A₄₅₀）×V 總÷（400×V樣本÷V提?。?/span>

=0.0125×（6.45 ×（A₅₃₂-A₆₀₀）-1.29×A₄₅₀）

V總：反應(yīng)體系總體積，0.5mL,；V樣品：加入樣品體積,，0.1 mL；Cpr：樣本蛋白質(zhì)濃度,，mg/mL,。W：樣品質(zhì)量，g,；400：細(xì)胞或細(xì)菌總數(shù),，400萬；V提?。禾崛∫后w積,，1mL。

2、植物組織中MDA含量計算

（1）按照樣品質(zhì)量計算

MDA含量（nmol/ g鮮重）=（6.45 ×（A₅₃₂-A₆₀₀）-0.56×A₄₅₀）×V總÷（W×V樣本÷V提?。?/span>

=5×（6.45 ×（A₅₃₂-A₆₀₀）-0.56×A₄₅₀）÷W

（2）按照蛋白濃度計算

MDA含量（nmol/ mg prot）=（6.45 ×（A₅₃₂-A₆₀₀）-0.56×A₄₅₀）×V總÷（Cpr×V樣本）

=5×（6.45 ×（A₅₃₂-A₆₀₀）-0.56×A₄₅₀）÷Cpr

V總：反應(yīng)體系總體積,，0.5mL；V樣品：加入樣品體積,，0.1 mL,；Cpr：樣本蛋白質(zhì)濃度，mg/mL,。W：樣品質(zhì)量,，g；V提?。禾崛∫后w積,，1mL。