哺乳動(dòng)物基因組DNA抽提試劑盒 核酸類(lèi)

產(chǎn)品貨號(hào)：11065

產(chǎn)品規(guī)格：50T/100T

產(chǎn)品簡(jiǎn)介：

哺乳動(dòng)物基因組DNA抽提試劑盒 核酸類(lèi)用分子生物學(xué)技術(shù)研究復(fù)雜的基因組,，首先要求制備純凈的高分子質(zhì)量DNA,，一般分為兩個(gè)步驟，先裂解細(xì)胞,、溶解DNA,，接著采用酶學(xué)或化學(xué)方法去除蛋白、RNA以及其他大分子,。尚寶生物 哺乳動(dòng)物基因組DNA抽提試劑盒(Mammalian genomic DNA extraction kit)采用經(jīng)典的蛋白酶K處理法,，可以抽提到100～150kb以上的基因組DNA，提取的基因組DNA可用于Southern雜交,、基因組DNA的PCR擴(kuò)增及基因組DNA文庫(kù)的構(gòu)建等,。該試劑盒的提取效率大致為，從1g組織可以提取到約150～200μg 100kb以上的基因組DNA,，從10 ～10 Hela細(xì)胞可以提取到約5～50μg 100kb以上的基因組DNA,。該試劑盒僅用于科研領(lǐng)域，不適用于臨床診斷或其他用途,。

產(chǎn)品組成：

自備材料：

1. 組織或培養(yǎng)細(xì)胞

2. PBS

3. 無(wú)水乙醇、70%乙醇

4. 25:24:1 酚/氯仿/異戊醇

操作步驟(僅供參考)：

1. 準(zhǔn)備樣品：

①組織樣本：切下組織并立即剪成小塊,，置于液氮中凍結(jié),。將 100mg～1g 凍結(jié)的組織用預(yù)冷的研缽和研杵研碎或用錘子將其搗成碎末。培養(yǎng)細(xì)胞：收集貼壁生長(zhǎng)或懸浮生長(zhǎng)細(xì)胞培養(yǎng)液,，貼壁生長(zhǎng)細(xì)胞需先用胰蛋白酶消化液消化,，再用 PBS 清洗一次。4℃離心機(jī)，1000～2000g 離心 1～2min,，棄上清,。用 1～10ml 預(yù)冷的 PBS 再次懸浮離心，如此 2 次洗滌,。

2. 每 1ml 樣品裂解液加入 5μl 的蛋白酶 K 溶液,，混勻。每 50mg 組織或 5×107 細(xì)胞用 0.5～0.6ml 樣品裂解液懸浮,，懸浮應(yīng)*,，不應(yīng)留下結(jié)塊,。

3. 充分混勻,，50℃振蕩下溫育 12～18h 或過(guò)夜。

4. 加入等體積 25:24:1 酚/氯仿/異戊醇,，輕輕混合,，盡可能減少對(duì) DNA 的剪切。

5. 吸出酚相及中間相(可以吸除少量靠近中間相的水相液體),，剩余的水相用等體積酚/氯仿/異戊醇再抽提一次,。重復(fù)該步驟 1 次。

6. 吸取上層液(水溶液)250～300μl 至新 EP 管中,，加入等體積無(wú)水乙醇和 1/4 體積的乙酸銨溶液,，顛倒混勻數(shù)次。

7. 4℃ 10000g 1min,，棄上清,。

8. 加入 70%乙醇，4℃ 10000g 1min,，棄上清,。重復(fù)該步驟一次。

9. 盡量吸除殘余的乙醇,，空氣干燥,，等到不到明顯液體時(shí)，立即加入 50～100μl Nuclease Free Water 溶解 DNA,，4℃或-20℃保存,。

注意：不可過(guò)分干燥基因組 DNA 沉淀，否則會(huì)極難溶解,。如果發(fā)現(xiàn) DNA 沉淀難以溶解,，可以在 4℃用搖床緩慢搖動(dòng)過(guò)夜，以溶解 DNA 沉淀,。

10. A 260 /A 280 處檢測(cè) DNA 純度,，高純度的 DNA 一般 A 260 /A 280＞1.8。

注意事項(xiàng)：

1. 如果打算提取大片段的基因組 DNA,，應(yīng)盡量避免基因組 DNA 的物理性剪切,。例如避免劇烈振蕩含有基因組DNA 的樣品,，可以用剪掉槍頭尖的槍頭吸取基因組 DNA 的樣品。

2. 準(zhǔn)備細(xì)胞樣品時(shí),，如果細(xì)胞量過(guò)少(＜3×107 ),，應(yīng) 0.3ml 含蛋白酶 K 的樣品裂解液。

3. 為避免高分子質(zhì)量 DNA 被剪切,，可以不采用乙醇沉淀 DNA,，可用透析袋替代乙醇：在 100 倍體積的 TE buffer中至少透析 2 次，所用取全部時(shí)間應(yīng)＞24h,。

4. 不可過(guò)分干燥基因組 DNA 沉淀,，否則會(huì)極難溶解。5. 為了您的安全和健康,，請(qǐng)穿實(shí)驗(yàn)服并戴一次性手套操作,。

有效期： 6個(gè)月有效。

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試劑盒

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DNA Marker   耗材

產(chǎn)品種類(lèi)齊全

品質(zhì)*穩(wěn)定

備貨充足發(fā)貨迅速

先后開(kāi)發(fā)了涵蓋分子生物學(xué),、細(xì)胞生物學(xué),、免疫學(xué)、生物醫(yī)學(xué)等領(lǐng)域的多種試劑及試劑盒,。同時(shí),，尚寶生物公司提供各種常規(guī)生化試劑，可隨時(shí)為廣大科研工作者提供各類(lèi)專(zhuān)業(yè)試劑,。