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全血基因組DNA提取系統(tǒng)（沉淀法）產(chǎn)品貨號：26237產(chǎn)品規(guī)格：50T/100T產(chǎn)品簡介：產(chǎn)品適用于處理新鮮的或已經(jīng)添加抗凝劑的血液樣品,，采用異丙醇沉淀方法，操作簡便,，尤其適合大量提取血液基因組DNA,。提取的DNA可用于PCR、酶切等常規(guī)分子生物學(xué)實驗,。本產(chǎn)品使用前請根據(jù)使用量將10×紅細(xì)胞裂解液用水稀釋成1×的即用型紅細(xì)胞裂解液,。處理血液量 1ml 5ml 10ml紅細(xì)胞裂解液(1×) 5ml 25ml 50ml白細(xì)胞裂解液 0.5ml 2.5ml 5ml蛋白沉淀液 0.5ml 2.5ml 5ml異丙醇 1ml 5ml 10ml75%乙醇 1ml 5ml 10mlDNA溶解液 100μl 0.5ml 1ml產(chǎn)品組成：試劑名稱 50T 100T10×紅細(xì)胞裂解液 30ml 60ml白細(xì)胞裂解液 30ml 60ml蛋白沉淀液 30ml 60mlDNA 溶解液 15ml 30ml操作步驟：以 1ml 全血為例1. 樣品的處理：在血液中加入 3 倍體積的 1×紅細(xì)胞裂解液(請確認(rèn)已經(jīng)稀釋過)，充分顛倒混勻,，12000rpm 離心 1min(如為大量提取并且為大離心機,，可 11000 轉(zhuǎn)離心 5min)，小心吸去上清,，再加入 2 倍體積的 1×紅細(xì)胞裂解液,，用移液器輕輕吹打沉淀，充分混勻,，離心,，棄上清，沉淀為白細(xì)胞,。2. 向沉淀中加 500ul 白細(xì)胞裂解液,，振蕩或者用移液器吹打至*混勻。65℃水浴 10-20min,，期間可顛倒離心管混勻數(shù)次,，直至溶液較為清澈看不見明顯細(xì)胞為止。3. 加入 500ul 蛋白沉淀液,，充分顛倒混勻,，此時會出現(xiàn)白色沉淀，65℃水浴 5min,，12000rpm 離心 5min,，小心吸取 上清(不要吸到下層沉淀或漂浮不溶物)，轉(zhuǎn)移到干凈離心管中,，如還有沉淀物,，可再次離心,。4. 在上清中加入 1ml 異丙醇，混勻,。12000rpm 離心 5min,，可看到管底有少量白色 DNA 沉淀，棄掉上清,。5. 向離心管中加入 1ml 75%乙醇,，12000rpm 離心 5min，棄去上清液,?？稍俅味虝弘x心用移液器去除殘余上清,。6. 將離心管敞口置于室溫或 50℃溫箱放置數(shù)分鐘,，否則乙醇可能影響后續(xù)的實驗如酶切、PCR 等,。7. 向離心管中加入 100-300ul DNA 溶解液,，室溫放置讓 DNA 自然溶解。如果 DNA 難于溶解,，可室溫放置過夜或?qū)?離心管置于 50-60℃水浴中水浴加熱 5min,。注意事項：1. 樣品應(yīng)避免反復(fù)凍融，否則會導(dǎo)致提取的 DNA 片段較小且提取量也下降,。2. 若試劑盒中的溶液出現(xiàn)沉淀,，可在 65℃水浴中重新溶解后再使用，不影響提取效果,。3. DNA 濃度及純度檢測：得到的基因組 DNA 片段的大小與樣品保存時間,、操作過程中的剪切力等因素有關(guān)?；厥盏玫?DNA 片段可用瓊脂糖凝膠電泳和紫外分光光度計檢測濃度與純度,。DNA 應(yīng)在 OD260處有顯著吸收峰，OD260 值為 1 相當(dāng)于大約 50μg/ml 雙鏈 DNA,、40μg/ml 單鏈 DNA,。OD260/OD280 比值應(yīng)為 1.7-1.9，如果洗脫時不使用洗脫緩沖液,，而使用去離子水,，比值會偏低，因為 pH 值和離子存在會影響光吸收值,，但并不表示純度低,。保存條件：室溫(15-25℃) 干燥保存，復(fù)檢期 12 個月,，2-8℃保存時間更長,。全血基因組DNA提取系統(tǒng)（沉淀法）