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通用基因組DNA提取試劑盒產(chǎn)品貨號：26240產(chǎn)品規(guī)格：50T/100T產(chǎn)品簡介：本試劑盒為通用型，適合于從土壤,，糞便,，昆蟲，以及其他樣本中提取基因組DNA,。對細菌,，真菌，昆蟲等樣本都具有很好的裂解效果,，最大限度的保留了生物DNA的多態(tài)性,。使用本試劑盒提取的DNA產(chǎn)量大、完整性好,，可直接用于各種常規(guī)操作,，包括酶切、PCR,、文庫構建、 Southern雜交等實驗,。產(chǎn)品組成：試劑名稱 50T 100TRNase A 1ml 1ml×2蛋白酶 K 1ml 1ml×2溶液 A 25ml 50ml溶液 B 25ml 50ml漂洗液 15ml 15ml×2洗脫液 15ml 30ml吸附柱 50 個 100 個收集管 50 個 100 個操作步驟：使用前請先在漂洗液中加入無水乙醇,，加入體積請參照瓶上的標簽,。所有離心步驟均為使用臺式離心機在室溫下離心。1. 樣品的處理：1）土壤：稱取 0.1-0.3g (根據(jù)干濕)土壤,，放入研缽中,，倒入適量的液氮，立即研磨,，重復 3 次,，使土壤顆粒研成粉末，加 500ul 溶液 A,，振蕩至*懸浮,。2）糞便：稱取 0.1-0.3g (根據(jù)干濕) 糞便，加 500ul 溶液 A,，振蕩至*懸浮,。3）昆蟲：稱取 0.1-0.3g 昆蟲，倒入適量的液氮,，立即研磨,，重復 3 次，使昆蟲研成粉末,，加 500ul 溶液 A,，振蕩至*懸浮。4）未知樣品,，如為細未狀,，可直接稱取 0.1-0.3g(根據(jù)干濕)加 500ul 溶液 A，如為塊狀,，可 0.1-0.3g 用液氮研磨成粉未,，再加 500ul 溶液 A，振蕩至*懸浮,。2. 向懸浮液中加入 20ul 的 RNase A（10mg/ml）,，55℃放置 10min。3. 加入 20ul 的蛋白酶 K（10mg/ml）,，充分混勻,，55℃水浴消化，30min,。消化期間可顛倒離心管混勻數(shù)次,，12000轉離心 10min。將上清轉移到一個新的離心管中,。如有沉淀,，可再次離心。4. 加入 500ul 溶液 B,，充分混勻,。如出現(xiàn)白色沉淀,，于 55℃放置 5min，沉淀即會消失,，不影響后續(xù)實驗,。如溶液未變清亮，說明樣品消化不*,，可能導致提取 DNA 量少及不純,，還有可能導致上柱后堵柱子，請增加消化時間,。5. 加入 500ul 無水乙醇,，充分混勻，此時可能會出現(xiàn)絮狀沉淀,，不影響 DNA 的提取,，可將溶液和絮狀沉淀都加入吸附柱中，放置 2min (分兩次加入,，每次 700ul),。6. 12000rpm 離心 2min，棄廢液,，將吸附柱放入收集管中,。7. 向吸附柱中加入 600ul 漂洗液(使用前請先檢查是否已加入無水乙醇)，12000rpm 離心 1min,，棄廢液,，將吸附柱放入收集管中。8. 向吸附柱中加入 600ul 漂洗液,，12000rpm 離心 1min,，棄廢液，將吸附柱放入收集管中,。9. 12000rpm 離心 2min,，將吸附柱置于室溫或 50℃溫箱放置數(shù)分鐘，目的是將吸附柱中殘余的漂洗液去除,，否則漂洗液中的乙醇會影響后續(xù)的實驗如酶切,、PCR 等。10. 將吸附柱放入一個干凈的離心管中,，向吸附膜中央懸空滴加 50-200ul 經(jīng) 65℃水浴預熱的洗脫液,，室溫放置5min，12000rpm 離心 2min,。11. 離心所得洗脫液再加入吸附柱中,，室溫放置 2min，12000rpm 離心 2min,，即可得到高質(zhì)量的基因組 DNA,。注意事項：1. 由于樣品不同,，最終提取的 DNA 含量和純度也有所不同,，一般來說,，如果所提取 DNA 用電泳的方法檢測不到，PCR 會有結果,，樣品盡可能的新鮮,。否則會導致提取的 DNA 片段較小且提取量也下降。2. 若試劑盒中的溶液出現(xiàn)沉淀,，可在 65℃水浴中重新溶解后再使用,，不影響提取效果。3. 如果樣品消化不*,，后面的離心步驟中可能會出現(xiàn)堵柱子的情況,，可適當延長離心時間。4. 洗脫緩沖液的體積最好不少于 50ul,，體積過小會影響回收效率,；洗脫液的 pH 值對洗脫效率也有影響，若需要用水做洗脫液應保證其 pH 值在 8.0 左右(可用 NaOH 將水的 pH 值調(diào)至此范圍),，pH 值低于 7.0 會降低洗脫效率,；DNA 產(chǎn)物應保存在-20℃，以防 DNA 降解,。5. DNA 濃度及純度檢測（濃度較高時）：得到的基因組 DNA 片段的大小與樣品保存時間,、操作過程中的剪切力等因素有關?；厥盏玫降?DNA 片段可用瓊脂糖凝膠電泳和紫外分光光度計檢測濃度與純度,。DNA 應在OD260 處有顯著吸收峰， OD260 值為 1 相當于大約 50μg/ml 雙鏈 DNA,、40μg/ml 單鏈 DNA,。OD260/OD280 比值應為 1.7-1.9，如果洗脫時不使用洗脫緩沖液,，而使用去離子水,，比值會偏低，因為 pH 值和離子存在會影響光吸收值,，但并不表示純度低,。保存條件：室溫(15-25℃) 干燥保存，復檢期 12 個月,，2-8℃保存時間更長,。開封后請將 RNase A，蛋白酶 K 于-20℃保存,。

通用基因組DNA提取試劑盒