動物組織/細(xì)胞基因組DNA提取試劑盒

產(chǎn)品貨號：26221

產(chǎn)品規(guī)格：50T/100T

產(chǎn)品簡介：本試劑盒采用可以特異性結(jié)合DNA的離心吸附柱和*的緩沖液系統(tǒng),，提取革蘭氏陽性菌基因組DNA。離心吸附柱中采用的硅基質(zhì)材料為本公司*新型材料,，能夠高效專一吸附DNA,，可最大限度去除雜質(zhì)蛋白及細(xì)胞中其他有機(jī)化合物。提取的基因組DNA片段大,，純度高,，質(zhì)量穩(wěn)定可靠。使用本試劑盒提取的基因組DNA可用于各種常規(guī)操作,，包括酶切,、PCR、文庫構(gòu)建,、Southern雜交等實驗,。

產(chǎn)品組成：試劑名稱 50T 100TRNase A 1ml 1ml×2蛋白酶 K 1ml 1ml×2溶液 A 10ml 20ml溶液 B 10ml 20ml漂洗液 15m1 15ml×2洗脫液 10m1 20m1吸附柱 50 個 100 個收集管 50 個 100 個

操作步驟：使用前請先在漂洗液中加入無水乙醇，加入體積請參照瓶體上的標(biāo)簽,。所有離心步驟均為使用臺式離心機(jī)在室溫下離心,。

1. 樣品的處理：

   a、細(xì)胞：取 1×106 -1×107 個懸浮培養(yǎng)細(xì)胞,，12000rpm 離心 1min 收集細(xì)胞,，貼壁細(xì)胞先用胰蛋白酶消化處理，再用預(yù)冷的 PBS 吹打成細(xì)胞懸液,，然后 12000rpm 離心 1min 收集細(xì)胞,，盡量除去上清，加 200ul 溶液 A,，振蕩至*混勻,。

   b、組織：組織量不宜過大,，一般不要超過 25mg,，可以使用勻漿器勻漿，最好用液氮研磨成粉末狀,，再用預(yù)冷的PBS 或無菌水充分懸浮,，然后 12000rpm 離心 1min 收集細(xì)胞，盡量除去上清,，加 200ul 溶液 A,，振蕩至*混勻。

   2. 向懸浮液中加入 20ul 的 RNase A (10mg/ml),，55℃放置 15min,。

   3. 加入 20ul 的蛋白酶 K( 10mg /ml )，充分顛倒混勻,，55℃水浴消化,，細(xì)胞消化時間較短，組織消化時間較長,，一般需要 1-3 個小時才能完成（鼠尾需要消化過夜）,。消化期間可顛倒離心管混勻數(shù)次，直至樣品消化*為止,。 消化*的指標(biāo)是：液體清亮及粘稠,。

   4. 加入 200ul 體積溶液 B，充分顛倒混勻,，如出現(xiàn)白色沉淀,，可放置于 75℃15-30min，沉淀即會消失,，不影響后續(xù)實驗,。如溶液未變清亮，說明樣品消化不*,，可能導(dǎo)致提取的 DNA 量少及不純,，還有可能導(dǎo)致堵塞吸附柱。5. 加入 200ul 無水乙醇,，充分混勻,，此時可能會出現(xiàn)絮狀沉淀，不影響 DNA 的提取,，可將溶液和絮狀沉淀都加入吸附柱中,。

   6. 12000rpm 離心 1min，棄廢液,，將吸附柱放入收集管中,。

   7. 向吸附柱中加入 600ul 漂洗液(使用前請先檢查是否已加入無水乙醇)， 12000rpm 離心 1min,，棄廢液,，將吸附柱放入收集管中。

   8. 向吸附柱中加入 600ul 漂洗液,，12000rpm 離心 1min,，棄廢液，將吸附柱放入收集管中,。

   9. 12000rpm 離心 2min,，將吸附柱敞口置于室溫或 50℃溫箱放置數(shù)分鐘，目的是將吸附柱中殘余的漂洗液去除,，否則漂洗液中的乙醇會影響后續(xù)的實驗如酶切,、PCR 等。

   10. 將吸附柱放入一個干凈的離心管中,，向吸附膜中央懸空滴加 50-200ul 經(jīng) 65℃水浴預(yù)熱的洗脫液,，室溫放置5min,，12000rpm 離心 2min。

   11. 可將離心所得洗脫液再加入吸附柱中,，12000rpm 離心 2min,，即可得到高質(zhì)量的基因組 DNA。

   注意事項:

   1. 試劑盒拆封后,，RNase A 和蛋白酶 K 需放置-20℃保存

   2. 樣品應(yīng)避免反復(fù)凍融,，否則會導(dǎo)致提取的 DNA 片段較小且提取量也下降。

   3. 如果試劑盒中的溶液出現(xiàn)沉淀,，可在 65℃水浴中重新溶解后再使用,，不影響效果。

   4. 洗脫緩沖液的體積最好不少于 50ul,，體積過小會影響回收效率：洗脫液的 pH 值對洗脫效率也有影響,，若需要用水做洗脫液應(yīng)保證其 pH 值在 8.0 左右(可用 NaOH 將水的 pH 值調(diào)至此范圍)，pH 值低于 7.0 會降低洗脫效率,。

   保存條件：室溫(15℃-25℃) 干燥保存,，復(fù)檢期 12 個月，2-8℃保存時間更長,。