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酵母基因組DNA提取試劑盒產(chǎn)品貨號(hào)：26230產(chǎn)品規(guī)格：50T/100T產(chǎn)品簡(jiǎn)介：本試劑盒采用可以特異性結(jié)合DNA的離心吸附柱和*的緩沖液系統(tǒng),，提取酵母基因組DNA。離心吸附柱中采用的硅基質(zhì)材料為本公司*新型材料,，能夠高效專(zhuān)一吸附DNA,，可最大限度去除雜質(zhì)蛋白及細(xì)胞中其他有機(jī)化合物。提取的基因組DNA片段大,，純度高,，質(zhì)量穩(wěn)定可靠,。使用本試劑盒提取的基因組DNA可用于各種常規(guī)操作，包括酶切,、PCR,、文庫(kù)構(gòu)建、Southern雜交等實(shí)驗(yàn),。產(chǎn)品組成：試劑盒內(nèi)容 50T 100T 保存條件RNaseA 1ml 1ml×2 -20℃蛋白酶K 1ml 1ml×2 -20℃酵母破壁酶 1.25ml 1.25ml×2 -20℃巰基還原劑 300μL 600μL -20℃山梨醇Buffer 25ml 50ml 室溫溶液A 10ml 20ml 室溫溶液B 10ml 20ml 室溫漂洗液 15ml 30ml 室溫洗脫液 15ml 30ml 室溫吸附柱 50個(gè) 100個(gè) 室溫收集管 50個(gè) 100個(gè) 室溫操作步驟 (僅供參考) ：使用前請(qǐng)先在漂洗液中加入無(wú)水乙醇,，加入體積請(qǐng)參照瓶體上的標(biāo)簽。所有離心步驟均為使用臺(tái)式離心機(jī)在室溫下離心,。1. 取酵母細(xì)胞不超過(guò)5×107 cell s),，12000rpm離心1min，盡量吸除上清,。2. 酵母細(xì)胞壁的破除：向酵母菌體中加入470ul山梨醇Buffer,。充分懸浮菌體，加入25ul酵母破壁酶和5ul巰基還原劑,，充分混勻,。30℃處理 2h，期間可顛倒離心管混勻數(shù)次,。3. 12000rpm離心lmin,，棄上清，收集沉淀,。4. 向沉淀中加入200ul溶液 ,，充分懸浮沉淀，向懸浮液中加入20ul的RNase A(10mg/ml),，充分顛倒混勻,，室溫放置 10min。5. 加入20ul的蛋白酶K(10mg/ml),，充分顛倒混勻,。65℃水浴消化15-30min,，消化期間可顛倒離心管混勻數(shù)次,，直至樣品消化*為止。6. 加入200ul溶液,，再加入200ul無(wú)水乙醇,，充分顛倒混勻，此時(shí)可能會(huì)出現(xiàn)絮狀沉淀,，不影響DNA的提取,，可將溶液和絮狀沉淀都加入吸附柱中，室溫放置2min,。7. 12000rpm離心2min,，棄廢液,，將吸附柱放入收集管中。8. 向吸附柱中加入600ul漂洗液（使用前請(qǐng)先檢查是否己加入無(wú)水乙醇）,。12000rpm離心1min,，棄廢液，將吸附柱放入收集管中,。9. 向吸附柱中加入600ul漂洗液,，12000rpm離心1min， 棄廢液,，將吸附柱放入收集管中,。10. 12000rpm離心2min，將吸附柱敞口置于室溫或50℃溫箱放置數(shù)分鐘,，目的是將吸附柱中殘余的漂洗液去除,，否則漂洗液中的乙醇會(huì)影響后續(xù)實(shí)驗(yàn)如酶切、PCR等,。11. 將吸附柱放入一個(gè)干凈的離心管中,，向吸附膜中央懸空滴加50-200ul經(jīng)65℃水浴預(yù)熱的洗脫液，室溫放置5min,， 12000rpm離心1min,。12. 離心所得洗脫液再加入吸附柱中，12000rpm離心2min,，即可得到高質(zhì)量的基因組DNA,。注意事項(xiàng)：1. 樣品應(yīng)避免反復(fù)凍融，否則會(huì)導(dǎo)致提取的 DNA 片段較小且提取量下降,。2. 若試劑盒中的溶液出現(xiàn)沉淀,，可在 65℃水浴中重新溶解后再使用，不影響提取效果,。3. 如果實(shí)驗(yàn)中的離心步驟出現(xiàn)柱子堵塞的情況,，可適當(dāng)延長(zhǎng)離心時(shí)間。4. 洗脫緩沖液的體積最好不少于 50ul,，體積過(guò)小會(huì)影響回收效率,；洗脫液的 pH 值對(duì)洗脫效率也有影響，若需要用水做洗脫液應(yīng)保證其 pH 值在 8.0 左右可用 NaOH 將水的 pH 值調(diào)至此范圍,，pH 值低于 7. 0 會(huì)降低洗脫效率,。 DNA 產(chǎn)物應(yīng)保存在-20℃，以防 DNA 降解,。5. DNA 濃度及純度檢測(cè)：得到的基因組 DNA 片段的大小與樣品保存時(shí)間,、操作過(guò)程中的剪切力等因素有關(guān)?；厥盏玫降?DNA 片段可用瓊脂糖凝膠電泳和紫外分光光度計(jì)檢測(cè)濃度與純度,。DNA 應(yīng)在 OD260處有顯著吸收峰,，OD260值為 1.0 相當(dāng)于大約 50μg/ml 雙鏈 DNA、40μg/ml 單鏈 DNA,。OD260/0D280比值應(yīng)為 1.7-1.9,，如果洗脫時(shí)不使用洗脫緩沖液，而使用去離子水,，比值會(huì)偏低,，因?yàn)?pH 值和離子存在會(huì)影響光吸收值，但并不表示純度低,。有效期：室溫干燥保存,，復(fù)檢期 12 個(gè)月，2~8℃保存時(shí)間更長(zhǎng),。