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λ噬菌體基因組DNA提取試劑盒（PEG沉淀法）

產(chǎn)品貨號：11137

產(chǎn)品規(guī)格：50T/100T

產(chǎn)品簡介：

λ噬菌體是最早使用的克隆載體,，其基因組是長度約為50kb的雙鏈DNA分子,，其在宿主細(xì)胞由兩種生活途徑：1、裂解生長：環(huán)狀DNA分子在細(xì)胞內(nèi)多次復(fù)制,，合成大量噬菌體基因產(chǎn)物,，裝配成噬菌體顆粒，裂解宿主菌再進行下一次感染,；2,、溶源性生長：感染細(xì)胞內(nèi)λ噬菌體DNA整合到宿主菌染色體DNA中與之一起復(fù)制，并遺傳給子代細(xì)胞,，宿主細(xì)胞不裂解?？蒲腥藛T常常利用λ噬菌體裂解生長的特點,，培養(yǎng)獲取大量的λ噬菌體顆粒,，并提取λ噬菌體DNA。噬菌體載體廣泛用于文庫篩選,，目的克隆培養(yǎng)獲得大量的噬菌體顆粒需要提取λ噬菌體DNA來開展測序等后續(xù)工作,。λ噬菌體裂解培養(yǎng)物離心后的上清，首先用RNase A /DNase混合酶消化去除殘留的宿主菌DNA/RNA,，沉淀收集噬菌體,，通過酚異戊醇等提取，殘留碎片通過沉淀離心去除,，通過一系列快速的漂洗,、離心的步驟，將鹽,、細(xì)胞代謝物,、蛋白等雜質(zhì)去除，獲得 DNA 的量很高,，但是純度一般,，但是足夠用于大

多數(shù)分子生物學(xué)實驗。

尚寶λ噬菌體基因組DNA提取試劑盒(PEG沉淀法)是簡便的λ噬菌體基因組DNA的試劑盒,，其提取原理是通過 PEG沉淀,、酚異戊醇等提取，殘留碎片通過沉淀離心去除,，通過一系列快速的漂洗,、離心步驟，將鹽,、細(xì)胞代謝物,、蛋白等雜質(zhì)去除，即可獲得λ噬菌體基因組DNA,，可進行酶切,、PCR等下游實驗。僅用于科研領(lǐng)域,，不用于臨床診斷或治療,。

產(chǎn)品組成：

自備材料：

1. 離心管

2. 低溫離心機,、搖床

3. 70%乙醇

操作步驟（僅供參考）： 以下操作以10ml噬菌體感染細(xì)菌培養(yǎng)上清液為例,。

1. 準(zhǔn)備工作：向RNase A和DNase I分別加入1ml的TE buffer吹打，顛倒混勻,，充分溶解RNase A和DNase I后,，按照每次使用量分裝-20℃凍存，6個月有效,。

2. 將0.1～0.5%氯仿處理后的λ噬菌體感染的12ml液體培養(yǎng)液轉(zhuǎn)移至離心管,，8000～10000g離心10min,，去除細(xì)菌碎片，取上清液,。一般建議8000g離心,，如果效果不佳可以考慮10000g，但轉(zhuǎn)速過高容易導(dǎo)致噬菌體也沉淀至管底,，降低產(chǎn)量,。

3. 取10ml上清液，加入5μl RNase A和10μl DNase I,，充分混勻,，37℃培養(yǎng)30min。

注意：噬菌體培養(yǎng)上清液會因生長和裂解情況不同致使殘留的RNA/DNA量不液不同,，RNase/DNase消化過度,，可能減少產(chǎn)量；消化不*,，DNA,、RNA可粘走部分噬菌體，一般RNase可以進行調(diào)整,，可根據(jù)實際情況適當(dāng)調(diào)節(jié)用量和消化時間,。

4. 向上清液中加入4ml噬菌體沉淀液，搖勻至溶解,，冰浴1h或4℃過夜,。

5. 4℃ 10000g 離心20min，棄上清液,。

6. 加入1ml SM buffer充分清洗管壁及沉淀,，轉(zhuǎn)移至新的離心管或微量離心管，加入40μl噬菌體裂解液,，68℃培養(yǎng) 15min,。

7. 加入等體積蛋白清除液，輕輕混勻,，12000g離心5min,，取上清液。

8. （備選步驟）轉(zhuǎn)移上清液至新的離心管中,，加入等體積預(yù)冷的噬菌漂洗液,，輕輕混勻，-20℃孵育1h,，4℃ 12000g 離心10min,，棄上清液。

9. 加入適量的70%乙醇溶液,，混勻,，4℃ 8000g離心8min,，棄上清液。如果有必要,，可以重復(fù)1次該清洗步驟。

10. 室溫自然干燥DNA,，加入適量TE buffer,，-20℃保存。TE buffer體積越大,，DNA濃度越低,。

注意事項：

1. 用于裂解的噬菌體、宿主菌越新鮮,，裂解越好,、收獲量越大。

2. 液體培養(yǎng)裂解時,，到了時間裂解還沒發(fā)生,，可適當(dāng)?shù)奶岣邷囟然蚣哟笳駬u速度。

3. RNase/DNase消化過度,，可能減少產(chǎn)量,；消化不*，可粘走部分噬菌體,。

4. 噬菌體裂解液在低溫下易結(jié)晶析出白色物質(zhì),，可37℃溫浴至*溶解。

有效期：6個月有效,。