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紫外法蛋白定量試劑盒

產(chǎn)品貨號(hào)：15228

產(chǎn)品規(guī)格：250T/500T

產(chǎn)品簡(jiǎn)介：

蛋白質(zhì)分子中存在含有共軛雙鍵的酪氨酸,、色氨酸,、苯丙氨酸，使蛋白質(zhì)在270～290nm波長(zhǎng)范圍內(nèi)具有吸收紫外光的性質(zhì),，其中酪氨酸的最大吸收峰為275nm,，色氨酸的最大吸收峰為280nm，苯丙氨酸的最大吸收峰為

257nm,。在上述波長(zhǎng)范圍內(nèi),，蛋白質(zhì)溶液的吸收值與其濃度呈正比，可作定量測(cè)定,。

尚寶生物紫外法蛋白定量試劑盒優(yōu)點(diǎn)是：操作迅速,、簡(jiǎn)便,，不易受低濃度鹽類的干擾；缺點(diǎn)是與標(biāo)準(zhǔn)蛋白中

酪氨酸,、色氨酸含量差異較大的蛋白質(zhì),，準(zhǔn)確性較差。樣品中含有嘌呤,、嘧啶及核酸會(huì)干擾檢測(cè)結(jié)果,。

產(chǎn)品組成：

自備材料：

1. 分光光度計(jì)或酶標(biāo)儀

2. 96孔板或離心管

操作步驟( 僅供參考) ：

1. 用去離子水或蒸餾水稀釋蛋白稀釋液(10×)至1×，即為蛋白稀釋工作液,。取1支20mg的蛋白標(biāo)準(zhǔn),，加入20ml蛋白稀釋工作液，即配制成蛋白標(biāo)準(zhǔn)(1mg/ml),，-20℃保存,。

2. 標(biāo)準(zhǔn)曲線法：取若干試管或96孔板,，如下操作以分光光度法為例,。選用1cm的石英比色皿，在280nm處以第1管作為調(diào)零點(diǎn),，分別檢測(cè)各管吸光度,，以A280為縱坐標(biāo)，以蛋白質(zhì)濃度為橫坐標(biāo),，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線,。

取1ml待測(cè)蛋白加至3ml的蛋白稀釋工作液中，混勻,，分光光度計(jì)或酶標(biāo)儀測(cè)定A₂₈₀,。

根據(jù)標(biāo)準(zhǔn)曲線計(jì)算出樣品的蛋白濃度。

3. Lowry-Kalckar法(又稱280nm和260nm吸收差法)：對(duì)于含有核酸的蛋白質(zhì),，無(wú)需制作標(biāo)準(zhǔn)曲線,。以蛋白稀釋工作液作為調(diào)零點(diǎn)，取1ml待測(cè)蛋白加至3ml的蛋白稀釋工作液中,，混勻,，分光光度計(jì)或酶標(biāo)儀測(cè)定A₂₈₀和A₂₆₀。根據(jù)經(jīng)驗(yàn)公式計(jì)算出待測(cè)樣品的蛋白濃度,，如果蛋白濃度過(guò)高應(yīng)用蛋白稀釋工作液稀釋后再行檢測(cè),。

蛋白質(zhì)濃度(g/L)=1.45×A₂₈₀ -0.74× A₂₈₀

4. Waddell法(又稱215nm和225nm吸收差法)：對(duì)于蛋白質(zhì)含量較少的溶液，適用于該法,。取若干試管或96孔板,，如下操作以分光光度法為例。以蛋白稀釋工作液作為調(diào)零點(diǎn),，取1ml蛋白標(biāo)準(zhǔn)(1mg/ml)加至3ml的蛋白稀釋工作液中,，混勻,，分光光度計(jì)或酶標(biāo)儀測(cè)定A₂₁₅和A₂₂₅。以215nm與225nm吸光度值之差(D=A₂₁₅-A₂₂₅)為縱坐標(biāo),，以蛋白濃度為橫坐標(biāo),，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線，再測(cè)出未知樣品的吸收差,，即可由標(biāo)準(zhǔn)曲線查出未知樣品的蛋白質(zhì)濃度,。或者不用制作標(biāo)準(zhǔn)曲線,，直接按照如下經(jīng)驗(yàn)公式計(jì)算：

蛋白質(zhì)濃度(g/L)=144×(A₂₁₅-A₂₂₅),。

注意事項(xiàng)：

1. 蛋白標(biāo)準(zhǔn)(BSA)粉末溶解于蛋白稀釋工作液，該液中含有防腐劑,，不影響后續(xù)檢測(cè),，該蛋白標(biāo)準(zhǔn)液-20℃保存。

2. 待測(cè)蛋白溶解于什么樣的稀釋液中,，蛋白標(biāo)準(zhǔn)也宜溶解于什么樣的稀釋液中,，否者待測(cè)蛋白與蛋白標(biāo)準(zhǔn)中所含非蛋白成分不一致，有可能導(dǎo)致測(cè)定不準(zhǔn)確,。

3. 如果沒有分光光度計(jì),，也可以使用酶標(biāo)儀測(cè)定，但應(yīng)考慮根據(jù)比色皿的最小檢測(cè)體積,。

4. 為了您的安全和健康,，請(qǐng)穿實(shí)驗(yàn)服并戴一次性手套操作。

有效期：12個(gè)月有效,。蛋白標(biāo)準(zhǔn)配制成溶液后應(yīng)-20℃凍存,。