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細(xì)胞活力/毒性檢測（CCK-8試劑盒）

產(chǎn)品簡介：

細(xì)胞活力/毒性檢測（CCK-8試劑盒）,，可用于細(xì)胞增殖和毒性分析，方法簡便而準(zhǔn)確,。其基本 原理為：該試劑中的 WST-8 與 MTT 類似,，在電子載體 1-甲氧基 PMS 的作用下，被細(xì)胞線粒體中的脫氫酶還原為具 有高度水溶性的橙黃色甲臜染料（Formazan）,，甲臜的生成量與活細(xì)胞的數(shù)量和活力成正比,，因此可利用這一特 性直接進(jìn)行細(xì)胞增殖和毒性分析。

操作步驟：

1,、使用 96 孔板,，細(xì)胞培養(yǎng)和處理完畢。

2,、每 100μl 細(xì)胞培養(yǎng)液加入 CCK-8 試劑 10μl,。

3、培養(yǎng)板放回培養(yǎng)箱，37℃孵育 1~4 小時(shí),。

4,、于 450nm 處測定 OD 值。

5,、結(jié)果分析將各測試孔的 OD 值減去對照孔或調(diào)零孔 OD 值,。各平行孔的 OD 值取平均數(shù)。

               細(xì)胞活力％=（加藥細(xì)胞 OD-空白 OD）/(對照細(xì)胞 OD-空白 OD)×100％

6,、若使用 96 孔外的培養(yǎng)板,，試劑用量等比例增減。

注意事項(xiàng)：

1,、*使用時(shí),，建議先做幾個(gè)孔摸索條件，考察接種細(xì)胞的數(shù)量和加入 CCK-8 試劑后的培養(yǎng)時(shí)間,。 2,、加入試劑速度要快，以避免試劑殘留和加樣速度不一所致反應(yīng)時(shí)間不同造成的顯色誤差,。有條件的情況下,，建 議采用多通道移液器，可以減少平行孔間的差異,。為避免槍頭上的殘留所帶來的加樣誤差,，CCK-8 試劑可在加樣前 用培養(yǎng)基稀釋混勻。

3,、試劑加入后輕輕振搖培養(yǎng)板,，使 CCK-8 試劑與培養(yǎng)基充分混勻。

4,、試劑加入后培養(yǎng)時(shí)間根據(jù)細(xì)胞種類的不同和每孔細(xì)胞數(shù)量的多少而異。對于貼壁細(xì)胞,，加入 CCK-8 的培養(yǎng)時(shí)間 一般為 1~4 小時(shí),，但在培養(yǎng) 30 分鐘左右即可取出肉眼觀察顯色程度（根據(jù)細(xì)胞種類而定）。與貼壁細(xì)胞相比,，懸 浮細(xì)胞較難顯色,。對于懸浮細(xì)胞，在加入 CCK-8 培養(yǎng) 1~4 小時(shí)后,，可先從培養(yǎng)箱中取出,，目測染色程度或用酶標(biāo) 儀測定決定。白細(xì)胞較難顯色,，因此需要較長的 CCK-8 反應(yīng)時(shí)間或增加細(xì)胞數(shù)量（~105 個(gè)細(xì)胞/孔）,。若顯色困難， 可以將培養(yǎng)板放回培養(yǎng)箱，繼續(xù)培養(yǎng)數(shù)小時(shí)后再確定,；注意：CCK-8 的反應(yīng)時(shí)間以具體顯色的時(shí)間為準(zhǔn),。 

5、CCK-8 試劑中的 WST-8 會與還原劑反應(yīng)生成 WST-8 甲臜,，如果實(shí)驗(yàn)中有還原劑,，需要檢查背景的 OD 值，即在不 含細(xì)胞的培養(yǎng)基中加入藥物,，然后加入 CCK-8 試劑在一定時(shí)間內(nèi)檢測,，和不加藥物的培養(yǎng)基進(jìn)行比較（只加 CCK-8 試劑），如果 OD 值明顯偏高,，則說明有反應(yīng),。

6、若細(xì)胞培養(yǎng)時(shí)間較長導(dǎo)致培養(yǎng)基顏色或 pH 發(fā)生變化,，建議更換新鮮培養(yǎng)基后再加入 CCK-8 試劑,。含有酚紅的 培養(yǎng)基不影響本試劑使用。

7,、如果樣品為高渾濁度的細(xì)胞懸液,，建議設(shè)定 600nm（或 600nm 以上）作為參比波長，扣除參比波長的 OD 值即可,。

8,、如果要測定細(xì)胞的具體數(shù)量，需要先做一個(gè)標(biāo)準(zhǔn)曲線,。

9,、若測得 OD 值過高，可酌減鋪板細(xì)胞數(shù)或 CCK-8 試劑用量,。

試劑的優(yōu)點(diǎn)：

1,、結(jié)果準(zhǔn)確，重現(xiàn)性好 試劑不影響細(xì)胞活力,，顯色產(chǎn)物直接溶解于培養(yǎng)液,，直接測定 OD 值即可， 可準(zhǔn)確反 應(yīng)細(xì)胞活力,。

2,、操作省時(shí)簡單 試劑即開即用，無需配制,；只需一步操作,，即可測定。

3,、安全性好 不含放射性同位素和有害有機(jī)溶劑,，使用安全。

4、靈敏度高 靈敏度高于 MTT,、XTT 和 MTS 等方法,。

貯藏條件：

在避光 0-5℃的條件下存放一年，測定效果*不變,。在-20℃的條件下可以貯存更久,。反復(fù)凍融會增加背景 值，經(jīng)常使用時(shí)請于 0~5℃條件下保存,。

本產(chǎn)品僅供科研使用,，不做其它用途。