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吖啶橙熒光染色試劑盒

產(chǎn)品貨號：R21805

產(chǎn)品規(guī)格：100T

產(chǎn)品簡介：

  吖啶橙( Acridine Orange,AO)屬于三環(huán)雜芳香燃料,可以標記 DNA,、RNA,屬于異染性熒光染料。該染料具有膜 通透性,能透過細胞膜,使核 DNA 和 RNA 染色,。因此 AO 常用于細胞內(nèi) DNA 和 RNA 進行檢測,。AO 與核酸結合方式主要 有:1、插入性結合,AO 嵌入核酸雙鏈的堿基對之間種結合方式主要為 AO 與 DNA 的結合,其熒光發(fā)射峰為 530nm,激發(fā) 后呈綠色熒光;2,、靜電吸引,帶正電荷的 AO 與單鏈核酸的磷酸根(帶負電荷)產(chǎn)生靜電間的吸引結合,這種結合方式 主要為 AO 與 RNA 的結合,其熒光發(fā)射峰為 640nm,激發(fā)后呈紅色熒光,少量結合會呈桔黃色或桔紅色熒光,。因此,吖 啶橙嵌合到雙鏈 DNA 分子中顯綠色,與 DNA 單鏈或 RNA 結合時發(fā)桔黃色或橙紅色熒光吖啶橙染色試劑盒( Acridine Orange Detection Kit)主要由 Ao Stain,、AO Stain Buffer 組成,常用于細胞凋亡的檢測。染色后在熒光顯微鏡 下觀察,吖啶橙可透過正常細胞膜,使細胞核呈綠色或黃綠色均勻熒光;而在凋亡細胞中,因染色質(zhì)固縮或斷裂為大 小不等的片斷,形成凋亡小體,。吖啶橙使其染上致密濃染的黃綠色熒光或黃綠色碎片顆粒;而壞死細胞黃熒光減弱甚 至消失,。吖啶橙染色常與 EB 染色合用雙染,EB 只染死細胞使之產(chǎn)生桔黃色熒光,由此可區(qū)分出正常細胞、凋亡細胞 及壞死細胞,。

試劑包裝：

自備材料：

1.熒光顯微鏡

2.低速離心機

3.PBS

4.細胞計數(shù)板、

5.載玻片,、蓋玻片

操作步驟(僅供參考)：

（一）AO 單獨染色

1.收集細胞(采用流式細胞儀檢測時,應先固定細胞),用 AO Stain Buffer(1×)清洗細胞 1 次,加入適量的 AO Stain Buffer(1×)重懸細胞,計數(shù)并調(diào)節(jié)細胞濃度至 10 6/ml,。

2.取適量的細胞懸液和 Ao Stain,按照細胞懸液: Ao Stain=19:1 的比例混合,輕輕混勻,。如果采用熒光顯微鏡下 觀察,一般取 95μl 細胞懸液和 5μl AO Stain 混合即可。

3.室溫避光染色 15min,滴加于載玻片上并加蓋玻片或上流式細胞儀分析,。

4.熒光顯微鏡下觀察(激發(fā)濾光片波長 488nm,阻斷濾光片波長 515nm),計數(shù)并拍照。

染色結果：

正常細胞    細胞被均勻染成黃綠色熒光

凋亡細胞    染色質(zhì)濃縮,細胞核碎裂成點狀,被染成大小與一,、致密濃染的綠色顆粒

（二）AO/EB 雙染色

1.收集細胞,用 Ao Stain Buffer(1×)清洗細胞 1 次,加入適量的 Ao Stain Buffer(1×)重懸細胞,計數(shù)并調(diào)節(jié)細 胞濃度至 10 6/ml,。

2.取適量的細胞懸液和 Ao Stain,按照細胞懸液 Ao Stain=19:1 的比例混合,并加人適量 EB 染色液,輕輕混勻。如 果采用熒光顯微鏡下觀察,一般取 95μl 細胞懸液和 5μl Ao Stain 混合即可,。

3.室溫避光染色 15min,滴加于載玻片上并加蓋玻片,。

4.熒光顯微鏡濾光片 515nm 觀察,計數(shù)并拍照,。

染色結果：

正常細胞    均勻染成綠色熒光

壞死細胞    細胞桔黃色熒光

調(diào)亡細胞    染色質(zhì)濃縮,細胞核碎裂,被染成大小不一、致密濃染的黃綠色 顆?；蛞姲|(zhì)芽狀突起

注意事項：

1.吖啶橙染色常與 EB 染色合用,，可區(qū)分出正常細胞、凋亡細胞及壞死細胞,。

2.如有低溫離心機進行離心效果更佳,，同事應注意減少試劑暴露于強光下的時間。

3.為了您的安全和健康,請穿實驗服并戴一次性手套操作,。

有效期：6 個月有效。